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PBMC 结核抗体分泌试验和酶联免疫斑点试验对活动性结核病临床诊断价值的研究硕士研究生：赵美芬导师：彭忠田副教授中文摘要目的：研究外周血单个核细胞（PBMC）分泌结核抗体试验和酶联免疫斑点试验（ELISPOT）对活动性结核病（TB）的临床诊断价值。方法：受试者共163例，包括活动性结核病患者104例（菌阳肺结核27例，菌阴肺结核61例，肺外结核16例）、结核分枝杆菌（MTB）潜伏感染者（LTBI）26 例和健康对照（HC）33 名。采用Ficoll密度梯度离心法分离受试者PBMCs，体外培养4 d 后收集培养上清液，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和蛋白免疫印迹法（WB）检测PBMCs培养上清液中抗原特异性结核抗体；用ELISPOT方法检测受试者早期分泌抗原靶6KDa蛋白（ESAT-6）、ESAT-6/培养滤出液蛋白-10（CFP-10）融合抗原刺激后产生γ-干扰素的T细胞水平；比较分析三种方法的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果：1.ELISA法检测TB组特异性结核抗体的OD值高于LTBI组和HC组（p0.001）；特异性结核抗体区分TB和LTBI、HC 的曲线下面积（AUC）分别为0.857、0.944，当cut-off值为0.42时，区分TB和LTBI的敏感度为77.9%，特异度为80.8%，阳性预测值为94.2%，阴性预测值为47.7%；区分TB和HC的敏感度为77.9%，特异度为93.9%，阳性预测值为97.6%，阴性预测值为57.4%。2. WB法检测活动性结核的敏感度为79.2%，特异度为100.0%，阳性预测值为100.0%，阴性预测值为40.7%（p0.001）。3. ELISPOT 法检测活动性结核的敏感度为82.7%，特异度为87.9%，阳性预测值为95.6%，阴性预测值为61.7%（p0.001）。24. ELISA、WB和ELISPOT 方法诊断活动性结核的敏感度、特异度、阳性预测值进行平行比较，差异均无统计学意义（p0.05）；阴性预测值进行平行比较，WB法的阴性预测值低于ELISA 法和ELISPOT法（p0.05）；ELISA和ELISPOT 法在菌阳组、菌阴组活动性肺结核的阳性检出率比较，差异均无统计学意义（p0.05）。5.ELISA、WB、ELISOPT法检测16例肺外结核的阳性率分别为81.3%、56.3%、68.8%。结论：1.PBMC结核抗体分泌试验的ELISA 法，对活动性结核的诊断效能高，并可以区分活动性结核、结核分枝杆菌潜伏感染及健康人。2. PBMC结核抗体分泌试验的免疫印迹法操作简便，诊断活动性结核的特异度高。3.PBMC结核抗体分泌试验与ELISPOT法对活动性结核均具有较高的诊断价值，PBMC结核抗体分泌试验可以作为结核病实验室诊断的新方法。关键词：结核, 结核抗体, 外周血单个核细胞, 酶联免疫吸附试验，酶联免疫斑点技术3StudyonclinicaldiagnosisvalueofactivetuberculosisbyPBMCstuberculosisantibodysecretiontestandEnzyme-linkedimmunespotassayAbstractObjective:Tostudyontheclinicaldiagnosisvalueof activetuberculosis(TB) byperipheralbloodmononuclearcells(PBMCs)secretingtuberculosisantibodytest and Enzyme-linked immunespot(ELISPOT)assay.Methods:163participantswereenrolledinthisstudy,including104patients withactiveTB(27casesofsmearpositiveTB,61casesofsmearnegativeTB,16 casesofextrapulmonaryTB),26patientswithMycobacteriumtuberculosis(MTB) latentinfected(LTBI)and33healthycontrols(HC).PBMCswereisolatedbyFicoll densitygradientcentrifugationmethod,andculturedinvitrofor4days,then collectingthecellculturesupernatantsofeachgroup.Antigen-specifictuberculosis antibodiesinsupernatantweredetectedbyindir