sirna抑制survivin基因对大鼠肝星状细胞hsc-t6凋亡的影响word论文.docVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 siRNA 抑制 Survivin 基因对大鼠肝星状 细胞 HSC-T6 凋亡的研究 研究生 阳美凤 导 师 彭安邦 教授 中文摘要 目的：利用小分子RNA（siRNA）干扰技术，抑制survivin基因的表达，研 究其对HSC-T6细胞株凋亡的影响及可能的机制。 方法：实验分为空白组、阴性对照组（pGPU6/GFP/Neo-shNC）、siRNA 组 （pGPU6/GFP/Neo-siRNA）。脂质体介导 survivin siRNA 转染 HSC-T6 细胞 24 小 时后,倒置荧光显微镜下观察转染效率。Survivin siRNA 转染 HSC-T6 细胞 48 小 时后，利用 RT-PCR、western-blot 检测 survivin mRNA 及蛋白表达的改变,倒置显 微镜下观察细胞形态学的改变，PI 单染流式细胞仪测定细胞凋亡率，western-blot 检测 caspase-3 蛋白的表达。 结果：survivin siRNA转染HSC24小时后，于倒置荧光显微镜下观察可见： siRNA组细胞内可见到清晰的绿色荧光，转染效率均达到75%；转染作用48小时 后,RT-PCR及werstern-blot结果显示：空白组、pGPU6/GFP/Neo-shNC组survivin mRNA及蛋白表达最丰富，pGPU6/GFP/Neo-siRNA组survivin mRNA及蛋白表达 较少，空白组与pGPU6/GFP/Neo-shNC组比较，无统计学意义（p0.05）；空白组、 pGPU6/GFP/Neo-shNC组与pGPU6/GFP/Neo-siRNA组比较，有统计学意义 （p0.05）。在倒置显微镜下观察，发现pGPU6/GFP/Neo-siRNA组细胞凋亡明显； PI单染流式细胞仪检测显示：与空白组、pGPU6/GFP/Neo-shNC组比较， pGPU6/GFP/Neo-siRNA组细胞凋亡率明显提高，有统计学意义（p0.05）；空白 组与pGPU6/GFP/Neo-shNC组比较，无统计学意义（p0.05）。werstern-blot结果 显示：空白组、pGPU6/GFP/Neo-shNC组caspase-3蛋白表达较少， pGPU6/GFP/Neo-siRNA组caspase-3蛋白表达丰富，空白组与 pGPU6/GFP/Neo-shNC组比较，无统计学意义（p0.05），空白组、 pGPU6/GFP/Neo-shNC组与pGPU6/GFP/Neo-siRNA组比较，有统计学意义 （p0.05）； 结论：1、Survivin siRNA 能抑制 survivin 基因及蛋白的表达； 2、Survivin siRNA 可能通过降低对 caspase-3 抑制作用而诱导 HSC-T6 细胞的凋亡。 关键词：Survivin；siRNA；肝星状细胞；caspase-3；凋亡； 本课题是湖南省科技厅资助研究项目，项目编号为（2007FJ3044） Detection of inhibition of survivin on induced apoptosis of rat HSC-6 cell by siRNA interference Abstract Objective:To explore the effects of siRNA targeting suvivin on HSC-6 and the possible mechanism. Methods:The experiment was divided into blank group, pGPU6/GFP/Neo-shNC group and pGPU6/GFP/Neo-siRNA group .The siRNA was transfected into HSC-T6 cells mediated by LipofectamineTM2000 for 24h, and then the efficiency of transfection was observed by fluorescence microscopy. After transfection for 48h, the changes of survivin mRNA and protein expression were assessed by reverse transcription-polyme -rase chain reaction(RT-PCR) method and Western-blot ,and the form of cells was observed by microscopy.. The apoptosis rate o