sonic hedgehog蛋白对永久性脑缺血的大鼠血脑屏障的保护作用及机制研究word论文.docxVIP

英汉缩略语名词对照表rHu ShhRecombinant Human Sonic hedgehog人重组 Shh 蛋白VEGFVascular Endothelial Growth Factor血管内皮生长因子Ang-1Angiopioten-1血管生成素-1ZO-1zonula occludens-1闭锁小带-1DMEMDulbeccos modified eagles medium基础培养基OGDOxygen-Glucose Dprivation糖氧剥夺模型BMECsBrain Microvascular Endothelial Cells脑微血管内皮细胞BBBBlood-Brain Barrier血脑屏障MCAOMiddle cerebral artery occulusion大脑中动脉梗塞PBSPhosphate Buffered Saline磷酸盐缓冲液TTC2,3,5-Triphenyltetrazoliumchloride solution2,3,5-三苯基氯化四氮唑溶液occludin紧密连接蛋白cycCylopamine环靶明TJSTight Junctions紧密连接1中文摘要[目的] Shh 蛋白对永久性脑缺血大鼠血脑屏障的保护及其机制的研究 [方法]采取改良线栓法制作 SD 大鼠左侧大脑中动脉栓塞模型（MCAO），术后立 即进行侧脑室注射并分别给予 rHu Shh（Shh 组）、PBS（PBS 组）、rHu Shh + Cyclopamine（Shh + Cyc 组），并于 1 天后观察神经行为缺损评分，采用干湿 称重法检测模型大鼠脑水肿，应用依文斯蓝外渗法检测血脑屏障通透性，TTC 法 检测模型梗塞面积，应用实时荧光定量 PCR 检测梗塞灶边缘区 Ang-1 及血脑屏 障相关分子（ZO-1, occludin, claudin-5）的 mRNA 表达水平，免疫印迹法检测上 述分子表达水平。原代培养星形胶质细胞和大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs）， 应用糖氧剥夺模拟体外缺血模型，给予 Shh、PBS、Shh + Cyc 预处理， 4 小时 后采用 ELISA 检测 Ang-1 表达水平，分别应用实时荧光定量 PCR 和免疫印迹法 检测 Ang-1 及血脑屏障相关关键分子（ZO-1、occludin、claudin-5 ）的 mRNA 和蛋白表达水平。[结果] （1）侧脑室注射 Shh 可以显著减轻脑缺血导致的神经功能缺损，减轻脑 水肿，降低血脑屏障通透性，减小梗塞面积；Shh 导致缺血梗塞区边缘 ZO-1, occludin、 claudin-5 、Ang-1 的 mRNA 水平和蛋白水平的表达增高； Cyc 可以 逆转 Shh 对上述分子的表达调控及对血脑屏障的保护作用；（2）Shh 可显著升高 OGD 处理的原代星形胶质细胞 Ang-1 的表达及分泌水平； Shh 可提高 OGD 处 理 BMECs 中 ZO-1, occludin、 claudin-5 、Ang-1 的 mRNA 水平和蛋白水平的表 达，应用 Ang-1 抗体可以逆转 Shh 对脑微血管内皮细胞的作用。[ 结 论 ] 外源性 Shh 可促进星形胶质细胞分泌 Ang-1 作用于脑微血管内皮细胞， 增加 ZO-1, occludin,、claudin-5 的表达，减少血脑屏障破坏及渗漏。[关 键 词 ] Sonic hedgehog，脑缺血，血脑屏障，ZO-1, occludin,Ang-12Recombinant Human Sonic Hedgehog Protein Regulates the Expression of ZO-1 and Occludin by Activating Angiopoietin-1 in Stroke DamagePostgraduate Candidate:Chen Shengcai Supervisor:Prof. Hu boObjective: This study examines the regulating effect of Sonic Hedgehog (Shh) on the permeability of the blood-brain barrier (BBB) in cerebral ischemiaMethods: Human recombinant Shh protein (rHu Shh) ， PBS ， rHu Shh plusCyclopamine was injected into cerebral ventricle immediately after the middle cerebral artery occlusion (MCAO) s