tlrs与wntβ-catenin信号通路在结肠癌细胞增殖中的crosstalkword论文.docxVIP

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2018-02-08 发布于上海
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tlrs与wntβ-catenin信号通路在结肠癌细胞增殖中的crosstalkword论文.docx

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结论：本实验结果表明LPS能够通过活化TLRs信号通路从而介导wnt/β-catenin通路的活化，从而干预顺铂引起的HT-29细胞凋亡；这些结果提示TLR4/NF-κB信号通路的活化，IL-6和TNF-a等炎性因子释放，能够介导wnt/β-catenin通路的活化从而促进结肠癌的发生发展。关键词：TLRs结肠癌wnt/β-cateninsiRNAAbstractObjectiveToexplorewheatherTLRscanpromotecancergrowthandinvasionvia activatingthewnt/β-cateninsignalingpathway,andtodemonstratethesignificanteffect and the possiblemechanism ofTLRs in colon cancer.MethodsInordertoclarifytheinfluenceofTLRsactivationontumorcell,we culturedcelllinesHT-29anddetectedtheexpressionofTLRsandwnt/β-catenin. Otherwise,overexpressionofTLRsandsiRNAmethodswereusedtofindoutthe relationshipbetweenTLRsandwnt/β-cateninsignalandtheeffectofTLRsonthe wnt/β-cateninsignalingpathwayactivationaswellasthegrowthandinvasionofcolon cancer.1)ThecoloncancercelllineHT-29wasstimulatedbyLPS,andthenRT-PCR methodwasusedtodetecttheexpressionofTLRsandWnt/β-cateninsignalingpathway relatedgenesinHT-29cells;2)UseMTTmethodtodetecttheproliferationofHT-29cells treatedwithLPSandDDP,thentochoosetheoptimumconcentrationandtimeofLPSand DDP,andtoestablishthedrugtolerancemodel;3)Thecellsweretreatedwithdrugsfor 48haccordingtothemethodofestablishingthedrugtolerancemodel,RT-PCRand WesternBlotmethodwasusedtomeasuretheexpressionofwnt/β-cateninsignaling pathwayrelatedgenes(wnt,β-catenin,P-GSK-3β),TLRs,IL-6andTNF-αmRNAin HT-29cells;4)NF-κB luciferasereportergenewastransferredintocells,andthendetected theactivationofNF-κBincellstreatedwithdrugsaccordingtothemethodofestablishing thedrugtolerancemodel;5)Theexpressionofwnt/β-cateninsignalingpathwayrelated genesinHT-29cellswhichweretreatedwithsiRNAtoinhibittheTLR4signingpathway weredetected byWestern Blot.Results1)RT-PCR results showedthatthelevel of TLRs(T1-T10)changedin differentdegrees,TLR2,TLR4,TLR5,TLR7,TLR8andTLR9expressionupregulatedin differentdegreesandtheupregulationofTLR2andTLR4mRNAwasthemostobviousin theLPS-treatedHT-29cells.Meanwhile,GSK-3βexpressiondownregulatedwhileWNT and β-catenin expressionupregulated in theLPS-treated HT-29 cells; 2) HT-29 cells t