地塞米松对大鼠心肌缺血再灌流损伤的保护作用-牛星阳技能学实验设计.docxVIP

地塞米松对大鼠心肌缺血再灌流损伤的保护作用实验背景心肌缺血再灌注损伤指缺血心肌在恢复血流再灌注后,反而加重其结构破坏,引起细胞死亡,导致梗死范围扩大,造成心功能的进一步损害并影响心肌梗死患者的预后。心肌缺血再灌注损伤的发病机制较复杂,氧自由基、钙超载、炎症介质是比较公认的机制,其中炎症反应是造成心肌缺血再灌注损伤损伤的重要原因之一。地塞米松是一种有效的抗炎药物，起到抑制炎症反应的作用。而心肌梗死中炎症反应是造成再灌注损伤的重要原因，因此可推测其可以起到抑制缺血再灌注损伤的症状，使梗死情况得到部分的控制。实验目的建立大鼠心肌缺血再灌注模型；观察实验各组缺血再灌注大鼠血流动力学情况变化；观察实验各组缺血再灌注大鼠心肌缺血坏死情况及其病理改变；实验对象K—H液(g/L)配方药品用量NaCl6.90gKCl0.35gCaCl20.28gNaHCO32.06gMgSO40.29gNa-Pyrurate0.22gGlucose2.15g大鼠，体重200-240 g实验药品与器材K-H液，肝素，蒸馏水、TTC染液，苏木精染液、促蓝液、evans blue染液，酒精、包埋剂、液氮、冷冻切片机、地塞米松，注射器、大量筒1个，Langendorff灌流装置，RM6240I型多道生物信号采集处理系统， 手术器械一套（直剪、弯剪、眼科剪各一，镊子，止血钳，手术线，纱布，注射器若干等），三通管，压力传感器，心电引导电极，动脉夹，超级恒温水浴锅，氧气瓶等。实验方法与步骤一、实验前准备将灌流系统用胶管连接，灌流液贮瓶灌满灌流液；混合气瓶的减压阀出口用软胶连接至灌流管内的充气管，调节气瓶上的减压阀，使灌流液中的气泡连续而且细小均匀；调节超级恒温水槽，使心脏插管内的灌流液温度恒定在37.9度；RM6240I型多道生物信号采集处理系统参数设置。心电引导电极连接。二、实验模型建立摘取心脏 取大鼠，提前15min注射肝素防治凝血，3%戊巴比妥（30mg/kg）麻醉后仰置于操作台上台上。沿胸前壁正中剪开皮肤，打开胸腔，轻轻提起心脏，小心剪断腔静脉、主动脉以及心脏周围组织，迅速将心脏连同一段主动脉取出；灌流心脏 心脏取出后立刻置于预先备好的充氧的4℃的K-H液中，于液面下进行主动脉插管，丝线结扎固定。并固定到Langendorff灌流仪上。用95%O2+%5CO2平衡的37℃、pH7.4的K-H液行主动脉逆行恒压灌流，灌流压力为80cmH2O；连接心电装置，分别在右心房、心尖、主动脉处安置三个心电引导电极；待心脏恢复稳定后，记录心电；自左心耳下方2-3mm入针，以prolene：6-0线在冠状动脉左前降支下缝过，缝扎的中点在左心耳和肺动脉圆锥的交界和心尖连线上，在肺动脉圆锥旁出针，结扎时用一细硬膜外麻醉管于结扎线之间，结扎冠状动脉。缺血30min；30min后解开结扎线，恢复再灌注1h，观察心电变化；再灌注结束后，取下心脏，进行OCT胶包埋，液氮速冻，进行冰冻切片，做HE染色；用Evans Blue染色确定缺血区域(area at risk,AAR),用TTC染色法确定梗死区域(infarct size,IS),用梗死区域占用缺血区域的比率(IS/AAR,%)来表示心肌梗死面积。三、实验分组SD大鼠15只，雌雄不限，体重相近，分为3组。分组数量/只处理对照组3用K—H 液连续灌流心脏至心脏稳定，不结扎缺血。腹腔注射相同剂量生理盐水提前给药组6地塞米松组大鼠给予中等剂量的地塞米松(0.8 mg/kg,腹腔注射)预处理 缺血再灌注组6腹腔注射相同剂量生理盐水预处理。用K—H 液连续灌流心脏至心脏稳定后,结扎冠状动脉左前降支30 min ,再灌注1h。实验数据分析通过对心电图、心率变化以及波幅的记录分析，得出整个心脏搏动水平的对比结果；以HE染色并在镜下观察对比几组间心肌细胞病理水平及病理变化；通过Evans Blue染色和TTC染色计算各组梗死面积。参考文献：[1]庄梅,方颖,吴立荣,雷大卫.地塞米松对大鼠心肌缺血再灌注后细胞凋亡及金属硫蛋白表达的影响[J].中华老年心脑血管病杂志,2008,07:533-536.[2]王自法,徐军,潘承恩,刘绍诰,董瑞.地塞米松抑制炎症递质改善鼠重症急性胰腺炎的预后[J].世界华人消化杂志,2000,02:239.[3]刘开宇,田海,孙露,李大为,贾智博,蒋树林,李仁科.标准化大鼠心肌梗死模型的制作[J].哈尔滨医科大学学报,2007,06:531-534.[4]尹倪,陈胜喜,罗万俊,蒋海河,龚伟.冠状动脉前降支结扎法制作大鼠急性心肌梗死模型[J].中国医师杂志,2006,09:1193-1195.[5]刘振,刘玲玲,杨廷桐.两种大鼠心肌梗死模型的比较研究[J].动物医学进展,2010,04:19-25.[6]翟昌林.甘草甜素对大鼠心