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玉米单倍体再生植株的SSR分析 　　摘要：使用４７个ＳＳＲ标记，对１０株玉米单倍体再生植株进行了遗传分析，结果表明，单倍体植株的带型均来源于其亲本，未发现无性系变异。分别筛选出２９对在郑５８与Ｂ７３间有多态性、１６对在西５０２与昌７２间有多态性的引物，对单倍体植株与其亲本间的遗传相似性系数进行分析，发现来源于郑５８／Ｂ７３的６株单倍体植株与郑５８的遗传相似性系数均小于其与Ｂ７３的遗传相似性系数，发生了偏向于Ｂ７３的遗传分离；具有西５０２／昌７２遗传背景的４株单倍体植株未见偏分离现象。 　　关键词：玉米；单倍体；ＳＳＲ；遗传分离 　　中图分类号：Ｓ５１２．１；Ｑ７８９ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８11423－4965-03 　　 　　ＳＳＲ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｍａｉｚｅ Ｒｅｇｅｎerａｔｅｄ Ｈａｐｌｏｉｄ Ｐｌａｎｔｓ 　　 　　ＨＵＡＮＧ Ｍｉｎ，ＤＵ Ｈｅ－ｗｅｉ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： １０ ｈａｐｌｏｉｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｍａｉｚｅ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｕｓｉｎｇ ４７ ｐａｉｒｓ ｏｆ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｎｏ ｓｏｍａｃｌｏｎａｌ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｈａｐｌｏｉｄ ｐｌａｎｔｓ ａｓ ｔｈｅｉｒ ｂａｎｄｉｎｇ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｆｒｏｍ ｔｈｅｉｒ ｐａｒｅｎｔｓ． Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ４７ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ， ２９ ｗｅｒｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍａｉｚｅ ｉｎｂｒｅｄ ｌｉｎｅ Ｚｈｅｎｇ５８ ａｎｄ Ｂ７３； ｗｈｉｌｅ １６ ｗｅｒｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｘｉ５０２ ａｎｄ Ｃｈａｎｇ７２． Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ， ｔｈｅ ６ ｈａｐｌｏｉｄ ｐｌａｎｔｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｏｍｉｎｇ ｆｒｏｍ Ｚｈｅｎｇ５８／Ｂ７３ ｗｅｒｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｅｇｒｅｇａｔｅｄ ｔｏｗａｒｄ Ｂ７３ ａｓ ｔｈｅｉｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｚｈｅｎｇ５８ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｓｍａｌｌｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｗｉｔｈ Ｂ７３； Wｈｉｌｅ ｎｏ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ４ ｈａｐｌｏｉｄ ｐｌａｎｔｓ ｗｉｔｈ ｇｅｎｅｔｉｃ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｏｆ Ｘｉ５０２／Ｃｈａｎｇ７２． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｍａｉｚｅ； ｈａｐｌｏｉｄ； ＳＳＲ； ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ 　　自交系的快速选育对提高玉米育种效率、缩短育种周期十分重要［1］。传统的二环系选育方法需要７个世代才能得到纯度为９９．２％的自交系，选育周期长，耗时、费力。而使用单倍体加倍技术只需２个世代便可得到纯度为１００％的双单倍体系，极大地缩短了育种周期，降低了成本，提高了效率，单倍体技术已经逐渐被广泛应用于玉米的遗传育种。玉米ＤＨ系获得的常用方法有两种：一是花药、小孢子组织培养技术；二是孤雌生殖单倍体技术。玉米花药和小孢子培养技术比较成熟，但是其培养周期长，过程复杂，受基因型、季节性影响大，且只局限于少数几个材料，严重阻碍了该技术在育种上的应用［2－4］。以Ｓｔｏｃｋ６为材料，选育出了许多单倍体诱导率高的诱导系［5－7］，然而，单倍体加倍率低一直制约着该技术在玉米育种上的应用。杜何为等［8］以玉米单倍体胚芽鞘节为外植体，建立了新的玉米单倍体组织培养体系。本研究对从该体系再生的单倍体植株进行了无性系变异分析，以期为该技术在玉米单倍体育种上的应用提供理论指导。 　　１ 材料与方法 　　１．１ 材料 　　１．１．１ 材料与试剂 玉米Ｆ１杂交组合西５０２／昌７２、郑５８／Ｂ７３由杜何为等组配［8］，玉米单倍体诱导系是来源于Ｓｔｏｃｋ６的母本单倍体诱导系。ＰＣＲ反应的Ｔａｑ Ｂｕｆｆｅｒ、ｄＮＴＰｓ和Ｔａｑ酶均购自Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ公司，其他试剂均为分析纯。 　　１．１．２ ＳＳＲ引物 参照王凤格等［9］，选用４７对ＳＳＲ引物用于无性系变异分析，引物名称及其在基因组上的定位见文献［8］。 　　１．２ 方法 　　１．２．１ 单倍体再生植株的获得 采用杜何为等［7］获得的单倍体再生植株。具体方法为：使用单倍体诱导系作为父本，分别与西５０２／昌７２、郑５８／Ｂ７３雌穗授粉。收获后选取紫顶白胚的单倍体子粒，经质量分数为２％的次氯酸钠溶液处理２０ ｍｉｎ、无菌水洗涤４～５次，接种于ＭＳ培养基中获得无菌苗。待单倍体