微生物学基本操作技术PPT.ppt

制订专门菌种保藏管理制度； 同一株菌种采用两种以上保藏方法保存； 对只能采用一种保藏方法的菌株备份存放于两个以上的保藏设备中； 对菌种的入库和出库记录入档，实行双人负责制管理； 设专人负责管理菌种保藏设施正常运行，定期检修维护。 五、微生物保藏 微生物菌种保藏方法 基本原理是在挑选优良纯培养物并使其处于休眠状态基础上，人为地创造一个有利于休眠的环境，使其长期保存后仍能保持菌种原有的优良特性。 基本措施是低温、真空、干燥。 五、微生物保藏 常用菌种保藏方法 定期移植法 液体石蜡法 真空冷冻干燥法 -80℃低温冻结法 液氮超低温冻结法 定期移植法 亦称传代培养保藏法，指将菌种接种于适宜的斜面培养基上，最适条件下培养，完成培养于4～6℃进行保存并间隔一定时间（3-6个月）进行移植培养的一种短期菌种保藏方法。 操作步骤： 斜面制备 接种 培养 保藏 斜面制备 培养基配制 分 装 灭 菌 摆放斜面 接 种 培养 细菌37 ℃ ，1-2d 酵母 28~30℃，2~3d 丝状真菌26 ℃，5~7d 保藏 4~6℃ 保藏3~6个月 培养和保藏 液体培养基分离 不能在固体培养基上生长的微生物仍需要用液体培养基分离来获得纯培养。 稀释法是液体培养基分离纯化常用的方法。 在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。 单细胞（孢子）分离 单细胞（或单孢子）分离法是采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。 较大的微生物，可采用毛细管提取单个个体。 个体相对较小的微生物，需采用显微操作仪，在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养 。 单细胞分离法对操作技术有比较高的要求。 选择培养基分离 选择培养基特性 促生长能力 抑制能力 指示（鉴别）能力 选择培养基分离 传统选择性培养基 血平板：适于各类细菌的生长，一般细菌检验标本的分离，都应接种此平板。 营养肉汤：用于标本及各类细菌的增菌 巧克力血平板：其中含有V和X因子，适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标本。 中国蓝平板或伊红美蓝平板：可抑制G+细菌，有选择地促进G-菌生长，是较好的弱选择性培养基。 麦康凯平板：具中等强度选择性，抑菌力略强，有较少革兰阴性菌不生长。 SS琼脂：有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。 碱性琼脂：用于从粪便中分离霍乱弧菌及其它弧菌。 选择培养基分离 新型显色培养基 利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物的培养基。 Organism Enzyme Substrate Color Coliforms β-galactosidase X-GAL Blue Escherichi a coli β- galactosidase β- Glucuronidase MUG fluorescence Escherichia coli O157 β- galactosidase X-GAL Blue 选择培养基分离 基于酶与底物反应的显色培养基技术 CHROMagar Petrifilm 3M Aerobic Count Plate Coliform Count Plate Rapid Coliform Count Plate E. coli /Coliform Count Plate Enterbacteriaceae Count Plate Yeast and Mold Count Plate Staph. aureus Express Count Plate Environmental Listeria Plate 基于酶与底物反应的显色培养基技术 四、微生物鉴定 四、微生物鉴定 多相鉴定（分类)（polyphasic taxonomy）是利用微生物从分子特性到生态特征的多种不同信息，综合表型和基因型特征进行微生物分类鉴定的方法。 四、微生物鉴定-形态学观察 细菌 酵母 丝状真菌 宏观 形态（培养特征） 将培养物划线或稀释涂布，30℃培养16~24小时，选取划线或稀释涂布分离得到单菌落，观察和记录菌落的形状、大小、质地、边缘、颜色、光泽、透明度、隆起等。 将培养物划线接种于葡萄糖-酵母提取物-蛋白胨固体培养基上，25℃培养2～3 d后，进行菌落形态观察，菌落质地、菌落颜色、菌落表面是否为反光或暗淡、菌落是平伏还是隆起、菌落边缘等。 标准培养基（CA、CYA、WA）平板倒转，向上接种三点，每个菌株接种两个平板，倒置于?25℃温箱中进行培养7天。观察菌落直径、颜色、质地、渗出液、菌落反面颜色等特征。 微观 形态（细胞特征） 将培养物在30℃条件下培