一种基于OmpA的分泌型原核表达载体的构建及应用 优先出版.pdf

网络出版时间：2016-07-28 18:36:22 网络出版地址：/kcms/detail/51.1705.R1836.026.html 基金项目：国家级大学生创新实验计划项目（No ：201313705003 ），成都医学院大学生创新实验计划项 目（No ：CXJS201309 ），四川省科技厅应用基础研究项目（No ：2015JY0205 ） △通信作者：杨平，E-mail ：920192655@  一种基于 OmpA 的分泌型原核表达载体的构建及应用 1 1 1 2 1 2 2△ 蒋玉亮 ，兰萍 ，李艳 ，余赟 ，毛明星 ，杨亚琼 ，杨平 1.成都医学院 生物医学系（成都 610500 ）; 2.成都医学院 基础医学院（成都 610500 ） 【摘要】 目的 构建大肠杆菌周质分泌型表达载体并验证其表达效果。方法 以pUC18-lpp 为基础载体，构建含有核糖体结 合元件（RBS ）、信号肽（OmpA）、多克隆位点（MCS ）的分泌型表达载体pUC-OmpA ；通过分子克隆获得含有密码子优化 的人生长激素（hGH)编码序列的 pUC-OmpA-hGH ，转化大肠杆菌JM109 菌株并验证周质分泌性质。结果 经 IPTG 诱导后， SDS、Western 印迹分析结果显示周质空间有hGH 重组表达产物，分子量约为 22 kD ，大小与预期结果一致，周质hGH 约占菌体总 hGH 的 43% 。结论 成功构建了基于 OmpA 信号肽的周质分泌型表达系统，为实现生物活性蛋白的原核表达奠 定基础。 【关键词】原核表达；周质分泌；信号肽 Construction and Application of A Secretory Prokaryotic Expression Vector Based on OmpA Signal 1 1 1 2 1 2 2  Peptide Jiang Yuliang , Lan Ping , Li Yan , Yu Yun , Mao Mingxing , Yang Yaqiong , Yang Ping . 1. School of Biomedical Sciences, Chengdu Medical College, Chengdu 610500, China; 2. School of Basic Medical Sciences, Chengdu Medical College, Chengdu 610500, China 【Abstract 】Objective To construct a secretory prokaryotic expression vector of the periplasmic space of Escherichia coli and to verify its expression effect. Methods The secretory expression vector pUC-OmpA was constructed by inserting the synthetic nucleic acid fragments which contain the ribosomal binding element (RBS), signal peptide (OmpA) and multiple clone sites (MCS) on the basis of the exp