中国药典2010版药品微生物检验指导原则－－罗慧萍2010.3.ppt

2010-03 中国药典2010版药品微生物检查指导原则 我国微生物检查发展概况 表 防腐剂抗菌效力标准 1 类 供 试 品 细 菌 7天菌数下降不少于1.0 lg，14天菌数下降 不少于3.0 lg ，第14天到28天菌数不增加。 真 菌 与初始值比，到7、14、28天菌数均不增加。 2 类供 试 品 细 菌 14天菌数下降不少于2.0 lg ， 14天到28天菌数 不增加。 真 菌 与初始值比，到14、28天菌数均不增加。 3 类 供 试 品 细 菌 14天菌数下降不少于1.0 lg ， 14天到28天菌数均不增加。 真 菌 与初始值比，14、28天菌数均不增加。 4 类 供 试 品 细菌，真 菌 与初始值比，14、28天菌数均不增长。 注：1、表中“不增加”是指对前一个测定时间，试验菌增加的数量不超过0.5 lg。 2、0时菌数 供试品加入试验菌，摇匀，立即取样检查，培养，计数，为0时 ，即初始值。 替代方法的一般要求 在以替代方法对样品检验的适用性进行验证前，必须证明所选用的替代方法具有方法适用性，即表明在不含样品的情况下，替代方法的专属性、精密度、检测限等参数。 确认方法的适用性后，用样品按上表规定的参数进行验证。验证至少用2个批号的样品，每批样品每个菌应至少平行进行三次独立实验。 参数验证的菌种应包括培养基适用性检查规定的菌种，必要时，还应根据替代方法及样品的特性增加相应的菌种。 定性检验的方法验证 微生物限度检查法应用指导原则 药品微生物实验室规范指导原则 2、检测限：是指在替代方法设定的检验条件 下，样品中能被检出的微生物的最低数量 ，该数量是指在稀释或培养之前初始样品所含有的微生物数量，而不是指检验过程中某一环节的供试液中所含有的微生物数量 。 验证的关键是确定接种菌的最低数量（每单位不超过5cfu），分别用药典方法和替代方法对该菌进行检验，比较两种方法的差异。与国外药典规定相同，要求试验菌的接种量应能够在采用药典方法检验时，有50％的检出率。 检测限验证至少应重复进行5次。 3、重现性：是指相同的样品在正常的实验条件（如实验场所、实验人员、仪器、试剂的批次等）发生变化时，所得检验结果的精密度 。反映了微生物检验方法在检验结果上抵抗操作和环境变化的能力 。 验证的关键是使接种菌的量在检测限以上，评价验证结果时，应排除样品均一性的影响 4、耐用性：是指当方法参数有小的刻意变化时，检验结果不受影响的能力，为方法正常使用时的可靠性提供依据 。 对替代方法进行耐用性评价，确定方法操作的关键注意点。 在开展了上述评价后，可以不必比较替代方法的耐用性与药典方法的差异。 定量检验的方法验证 1、准确度：是指替代方法的检验结果与药典方法检验结果的一致程度。准确度的确认应在检验的范围内。通常用微生物的回收率（％）来表示准确度 。 验证的菌浓度应该在检测范围内，一般应选择能够准确计数的最高浓度，系列稀释至较低浓度，并且至少应该有5种浓度，每种浓度重复检验5次。 替代方法的回收率应该达到70％以上。 当替代方法并不依赖微生物生长出菌落或出现混浊来进行定量时，可能出现回收率高于药典方法的情况，此时应结合专属性的内容对准确性进行评价。 2、精密度：是指在检验范围内，对同一个均匀的样品多次重复取样测定，其检验结果的一致程度。通常采用标准偏差或相对标准偏差（变异系数）来表示 。 验证的菌浓度同准确度，每种浓度重复检验10次。 可以接受的相对标准偏差（RSD）应不大于35％。一般来说，替代方法的相对标准偏差（RSD）应不大于药典方法。在该项目上，USP 的规定是15％～35％，研究表明，当含菌浓度在30～300cfu/ml时，计数结果的RSD完全可能在15％以内，因此，指导原则中对该指标作了修改。 3、专属性：是指通过检测适宜的试验菌，以证明检验方法与其设定目的相适应的能力。 例如，菌落计数平皿法其设定目的在于检出一定数量的微生物，则其专属性验证应证明当样品中存在一定数量的试验菌时