03+实验三+沉淀+凝集反应.ppt

一、凝集反应 　　在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原(如红细胞)与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。 1.ABO血型鉴定实验原理 　　人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。 　　　　　　ABO血型的划分 2.实验材料 　　1．ABO血型鉴定试剂盒　内含抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支（抗A为蓝色，抗B为黄色）。 　　2．一次性采血针1枚、洁净玻片2块、75％酒精、灭菌棉签。 　　3．生理盐水 二、沉 淀 反 应 1.实验目的要求 p.252 4)．温育 置湿盒37℃温育12-24 h。 5. 结果观察 以出现明显沉淀线的最高稀释度为该羊抗人血清的效价。 记录琼脂玻片双向扩散是否有沉淀线,分布在哪几档稀释度之间? 并画图。 * 实验四 抗原抗体反应技术 一 、凝集反应p.244 二 、沉淀反应p.252 (一) ABO血型鉴定实验 抗A、抗B —、— O型 —、— A、B AB型 抗A B B型 抗B A A型 血清中Ab 红细胞表面Ag 3.方法 (2) 各加一滴血液,快速混匀 (1) 分别加抗A, 抗B血清 +抗A血清 +抗B血清 每人1个玻片 不凝集（-） 凝集（+） 4.实验结果 　　记录受检者红细胞凝集情况，根据ABO血型鉴定表，判断受检者的血型。 　　　 “＋”表示红细胞凝集，“－”表示红细胞未凝集 — — + + + — — + 血型 抗B分型试剂侧 抗A分型试剂侧 抗A、抗B —、— O型 —、— A、B AB型 抗A B B型 抗B A A型 血清中Ab 红细胞表面Ag ABO血型的划分 (二)志贺杆菌玻片凝集实验 1. 材料 志贺杆菌诊断血清 待鉴定细菌 2 .原理(玻片凝集) 将已知抗体直接与未知抗原物质（如细菌）混合，在电解质存在条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性. 3.方法 生理盐水 志贺诊断血清 + + 待检菌 待检菌 2人一个玻片 4.注意事项： （1）生理盐水、诊断血清要适量； （2）待检菌为肠道致病菌，注意无菌操作， 玻片用后放入消毒缸内； （3）用接种环取待检菌时，不要挑取琼脂； 待检菌与生理盐水、诊断血清混匀时， 不要涂得太宽，否则影响结果观察。 5.结果观察与判断 现象 结论 待检菌 待检菌 + + 生理盐水 志贺诊断血清 2.基本原理 可溶性抗原如血清、毒素、细菌浸出液等与相应抗体结合，当两者比例合适、并有适量电解质存在时，形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线，称为沉淀反应。 3.材料 1)．人血清、羊抗人血清。 2)．1.5%琼脂（用生理盐水或巴比妥缓冲液配成）。 3)．载玻片、移液枪、湿盒。 4. 方法 1)．制备琼脂玻片 将已知加热溶化的1.5%琼脂3.5ml(已制备好,在水浴锅中)，迅速倾入载玻片上。（每2人倒一个玻片） 2)．打孔 待凝固后用打孔器(玻璃管)按下图样打孔。（孔径3mm，孔距4mm）（每人打一个梅花） 3)．加样 以上方孔为第1孔，按顺时针方向分别称为2、3、4、5和6孔，中央孔为7孔。7孔加入1:10人血清10 ?l(已稀释好) ，1-5孔加入对倍稀释的羊抗人血清（原液，1:2，1:4，1:8，1:16,V/V） 10 ?l ；6孔加入生理盐水10 ?l ，作为阴性对照孔。 每孔加样10