1细胞系的生命期.ppt

细胞系的生命期 原代培养 Primary culture 原代培养 Primary culture 概念从体内取出组织细胞开始培养到 第一次进行传代之前的时期 一个特征性的必然的生长阶段。 完成了从体内环境到体外环境的 过渡和适应过程， 恢复了分裂增殖与 生长发育 的能力 含义:包含)①原代培养实质是初次培养，即培养物接种到培养器皿  中就不再分割，任其生长繁殖②原代培养中的“代” 并不是指细胞繁殖的“代”数③原代培养过程中不分割培养物 不等于不更换培养液 建立方法:组织块法,分散(细胞悬液）法 时间: 一般~4周 (代：细胞自接种至新培养皿中至其下一次再接种传代的时间为细胞的一代) 特点 (1)性质 ①性状似体内 可表达某些形态、结构、功能,更能  代表活体细胞最接近在体时的情况 ②细胞异质性 细胞成分混杂，除目的细胞之外， 其它各种细胞还存在 ③细胞活跃移动，分裂不旺盛 ④相互依赖性强 独立生存能力差,不易单个培养 特点 (2)发展过程:调整组成 原代培养的产生- -选择 结果:形成相对均一的细胞系 选择第一步:形成原代培养的基础 组织块:能迁移出的 消化分散:操作中能生存、附着 能悬浮生存 特点-发展过程 选择第二步: 时间：数小时后至铺满 (汇合confluence) 变化：数小时后至进一步选择中 3种情况:能增殖 能存活 不能存活 细胞类型,继续改变,至铺满(铺满:贴附生长的细胞在培养器皿中生长达到一定数  量彼此连接成单层长滿器皿底壁) 特点-发展过程 选择第三步: 时间：铺满(汇合confluence)后  (可用于生长区域已被利用) 变化：通过密度抑制 密度抑制敏感的细胞(如正常细胞)  密度抑制敏感低的细胞(如永生性细胞) 特点-发展过程 需及时传代传不传代及何时传代 根据： 接种的细胞数量 培养瓶皿的大小 培养条件 在一定程度上具有可人为操作的特征 传代期- -细胞系 Subculture - - Cell line 传代期- -细胞系 Cell line 概述将原代培养物经过分割，重新接种 到两个或两个以上 的器皿内进 行培养，进入传代培养期整个培养过程的主要时期 原代培养物----要经过反复传代传代培养期 并不单指原代培养物经首次传代  后的“第一代”培养过程 而是指由首次传代开始经 反复传代一直到培养物 开始衰退之前的全部时间 传代：细胞生长繁殖一段时间，到达一定细胞密度后，就应将细胞分离成二或 几部份至新的培养器皿并更新补充培养液，使之继续繁殖生长，即传代。 经过传代即称为细胞系细胞系可以继续传代 传代培养期就是 维持细胞系增殖、生长的培养过程 传代培养期的长短： 培养的细胞种类 供体年龄大小 一般是有限细胞系 特点细胞分裂增殖活动旺盛，细胞生长活跃细胞群体在调整：每次传代,调整 -  因增殖能力、耐受力差异 增殖能力较强的细胞渐处于优势 其它逐渐淘汰 传代培养早期，细胞尚能保持二倍体核型 随着传代次数增加 细胞发生转化的概率增大 能维持的代数一般是有限细胞系种族(主要):成纤维细胞 人,50; 猴,40; 鸡,37;鼠,8 部位:人: 胚肺 50±10; 肾8~19  猴: 肺 5; 肾 20; 耳 40条件:如表皮细胞 +EGF 从50代 增加至150年龄 传代的频率原则上 贴壁生长将长满培养罪皿的生长面(器皿的底壁) 悬浮培养下细胞密度足够大具体时间并没有定时， 根据 具体情况，但提前或过晚 (尤以后者)都不合适 一般:数天~ 一周因素: 接种细胞数量:量大- 快 接种细胞性质:细胞系比原代- 快 培养液:高血清- 快 意义 生物学意义:形成较均一的细胞