20 革兰氏阳性无芽孢杆菌.ppt

第二十章 革兰氏阳性无 芽孢杆菌 岳 华 ??? 丹毒丝菌属 ?? 本属只有一种，即猪丹毒丝菌，是猪丹毒病的病原体，通称猪丹毒杆菌。DNA的G十Cmol/%为36～40。 形态与染色 本菌为直或稍弯曲的细杆菌，两端钝圆，大小0.2～0.4um×0.8～2.5um，单在或呈V形、堆状或短链排列，易形成长丝状。G+，在老龄培养物中菌体着色能力较差，常呈阴性。无鞭毛、无荚膜、不产生芽孢。 培养与生化特性 本菌为微需氧菌。pH在6.7～9.2范围内均可生长，最适pH为7.2～7.6，生长温度为5~42℃，最适温度为30～37℃。在普通琼脂培养基和普通肉汤中生长不良，如加入0.2%～0.5%葡萄糖或5%～10%血液、血清则生长茂盛；在血琼脂平皿上经37℃24h培养可形成湿润、光滑、透明、灰白色、露珠样的圆形小菌落，并形成α 溶血环。在麦康凯培养基不生长。在肉汤中呈轻度浑浊，有少量白色黏稠沉淀。不形成菌膜和菌环。 在加有5%马血清和1%蛋白胨水的糖培养基中可发酵葡萄糖、果糖和乳糖，产酸不产气;不发酵甘露醇、山梨醇、肌醇、水杨素、鼠李糖、蔗糖、渔藻糖、棉实糖、菊糖。产生H2S，不产生靛基质和接触酶，不分解尿素。甲基红及VP试验阴性。明胶穿刺生长特殊，沿穿刺线横向四周生长，如试管刷状，但明胶不液化。 抵抗力 本菌对腐败和干燥环境有较强的抵抗力。在饮水中可存活5d，在污水中可存活15d，在深埋的尸体中可存活9个月。在病死猪熏制的火腿中3个月后仍可在深部分离出活菌。对热和直射光较敏感，70℃经5～15min可完全杀死。对常用消毒剂抵抗力不强，0.5%甲醛数十分钟可杀死。用10%生石灰乳或0.1%过氧乙酸涂刷墙壁和喷洒猪圈是目前较好的消毒方法。本菌可耐0.2%的苯酚，对青霉素很敏感。 抗原结构与血清型 本菌最初被分为A、B、N型。现通用阿拉伯数字为型号，用英文小写字母表示亚型，目前共有25个血清型和1a、1b及2a、2b亚型。分型是依据菌体可溶性的耐热肽聚糖的抗原性。大多数菌株为1型和2型 (相当于以前的A型和B型)，从急性败血症分离的菌株多为la型，从亚急性及慢性病病例分离的则多为2型。 致病机理与致病性 本菌通过消化道感染，进入血流，而后定殖在局部或引致全身感染。已知无致病力菌株对消化道上皮细胞黏附力差，且易被吞噬细胞消化。但致病菌株的黏附素及抗吞噬物质尚不清楚。 末发现外毒素，细菌产生的神经氨酸酶是可能的毒力因子，菌株的毒力与该酶的量有相关性，酶的存在有助于菌体侵袭宿主细胞。在细菌神经氨酸酶的作用下，宿主组织黏蛋白、血纤维蛋白原等被除去N-乙酚神经氨酸，从而减弱了黏蛋白筹对机体的保护作用。感染动物能产生神经氨酸酶抗体，已证实实验动物通过对该酶的主动或被动免疫可获得保护。 本菌在自然界分布十分广泛，可寄生于哺乳动物、禽和鱼类。其中猪分离率最高，可引致3～12月龄猪猪丹毒;3～4周岁的羔羊可致慢性多发性关节炎;鸡与火鸡感染后呈现衰弱和下痢;鸭可出现败血症，并侵害输卵管。小鼠和鸽子最易感，实验感染时皮下注射2～5d内呈败血死亡;家兔和豚鼠抵抗力较强。 人可经外伤感染，发生皮肤病变，称 类丹毒，病状与人的丹毒病相似，但后者由化脓链球菌所致。 从健康猪的扁桃体、禽类及水生动物体表均可分离出不同血清型的菌株，这些菌株对小鼠和仔猪有较强的致病力。已从70多种动物中分离到本菌，带菌率和发病率与饲养条件、气候变化及猪龄大小有密切关系，是一种“自源性传染病”。 微生物学诊断 1、显微镜检查 可采取高热期病猪耳静脉血作涂片，染色、镜检。死后可采取心血及新鲜肝、脾、肾、淋巴结等制成涂片，革兰氏染色镜检。如发现少量典型杆菌，可初步确诊。如为慢性心内膜炎病例，可用心脏瓣膜增生物涂片，镜检。羔羊患关节炎病时，可检查关节滑膜囊液。 2、分离培养 分离培养时可用含有0.2%(W/V)的葡萄糖或5%～10%无菌马血清(W/V)的半固体琼脂培养基。为提高分离率可采用含有1/100万结晶紫、l/5万叠氮钠的10%马血清肉汤及琼脂平板。也可在马丁肉汤中加入新霉素 (400ug/ml)或万古霉素 (70ug/ml)，抑制某些杂菌生长。 3、细菌鉴定 主要考虑与李氏杆菌鉴别诊断，区别要点见本章李氏杆菌有关内容。可用鸽子肌肉注射培养物，死后取心血和脾脏涂片，染色、镜检，并同时分离细菌。血清型鉴定时，将待鉴定菌株的纯培养物加入1%甲醛灭活，经洗涤、高压、离心处理后制成沉淀原，与模式菌株的高免血清作琼脂扩散试验。 4、血清学诊断 可采用生长凝集试验诊断，是根据猪丹毒杆菌在生