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第二十二章 分支菌属 岳 华 本属菌在自然界分布广泛，许多是人和多种动物的病原菌。对动物有致病性的主要是结核分支杆菌、牛分支杆菌、禽分支杆菌及副结核分支杆菌。代表种为结核分支杆菌。本节将重点介绍牛分支杆菌与副结核杆菌。 牛分支杆菌 本菌与人的结核分支杆菌（简称结核杆菌）和禽分支杆菌多特性相近，本节一并介绍。 形态与细胞壁组成结核分支杆菌为细长、直或微弯的杆菌，单在、少数成丛，大小为0.2～0.5um×l.5～4.0um。牛分支杆菌菌体较短而粗，禽分支杆菌呈多形性。在陈旧的培养基或干酪性病灶内的菌体可见分支现象。 与一般革兰氏阳性菌不同，本菌的细胞壁不仅有肽聚糖，还有特殊的糖脂。因为糖脂的影响，致使革兰氏染色不易着染，而抗酸染色为红色。糖脂包括阿拉伯半乳糖脂复合物及分支菌酸等。糖脂的含量超过菌体总量的10%，远远超过其他细菌类脂的含量。糖脂成分有效地刺激哺乳动物的免疫系统，分支杆菌因此被制成免疫佐剂得到普遍应用。 致病机理及致病性 本菌的致病过程是以细胞内寄生和形成局部病灶为特点。细菌主要通过呼吸道侵入机体肺泡，被巨噬细胞吞噬，但不被消化降解，相反在其内繁殖，形成病灶，产生干酪样坏死。坏死灶被吞噬细胞、T细胞与B细胞等包围，形成结核结节。免疫低下者此种局限性病灶可能破溃，菌体排入支气管，随痰咳出体外;或者病灶液化，扩散进入血流及其他器官，造成机体死亡。对于免疫正常者而言，局限性病灶在活化的巨噬细胞作用下，其内细菌停止生长，病灶钙化而痊愈。 结核杆菌主要引起人的结核病，灵长类动物、犬及其他与人接触的动物均可感染;实验动物中以豚鼠、仓鼠力量敏感;可使小鼠致病，山羊和家禽对结核分支杆菌不敏感。 变异性 该菌可发生多种变异现象。1～l0ug/ml异烟肼可诱导本菌的形态变异产生L型，胞壁消失，呈多型性，并产生对异烟肼的耐药性。在陈旧培养基上菌落由粗糙型变为光滑型，这种变异也可导致毒力减弱。卡氏(Glmette)和介氏(Guerin)将牛分支杆菌在培养基上经13年230次传代，便有毒菌株变为毒力减弱菌株，对人、牛无致病性，成为现在广泛应用的卡介苗（BCG）。 免疫性与变态反应 研究较多的是结核杆菌。细菌侵入机体后，机体主要产生细胞免疫。1977年Lenzin发现结核病的细胞免疫和体液免疫存在分离现象，细胞免疫随病情的加重而减弱，体液免疫则随病情的加重而增强。凡病情得到控制或康复的动物，其细胞免疫可达到一定水平，而血清中抗体水平较低。重症动物的细胞免疫反应低下，甚至消失，血清中特异性抗体显著增加。 原因在于不同抗原成分激活不同的T细胞，可产生巨噬细胞移动抑制因子 (MlF)或结核杆菌生长抑制因子，前者可致变态反应性炎性反应，后者可特异性地抑制巨噬细胞内的结核杆菌的繁殖，从而获得免疫。完整的结核杆菌可刺激MlF及MyoIF同时产生，因此检测机体对结核杆菌是否发生变态反应，即可判定是否有免疫力，结核菌素试验正是根据这一原理设计的最常用的免疫学检测手段。 微生物学诊断 1、显微镜检查 取患病器官的结核结节及病变与非病变交界处组织直接涂片，抗酸染色后镜检，如发现红色成丛杆菌时，可做出初步诊断。 2、分离培养 将病料中加入6%H2SO4或4%NaOH液处理l5min后，经中和、离心，取少许沉淀物接种在培养基斜面上，每份病料接4～6管，管口封严，置37℃培养8周，每周观察一次，培养阳性时，需进行培养特性和生化特性鉴定。 4、变态反应 采用PPD皮内注射法，按我国《动物检疫操作规程》规定，牛颈部皮内注射0.lml(10万lU/m1)72h后局部炎症反应明显，皮肿胀厚度差≥4mm为阳性;如局部炎症不明显，皮肿胀厚度差在2～4mm间，为疑似;如无炎症反应，皮肤肿胀厚度差在2mm以下，为阴性。凡判为疑似反应牛，30d后需复检一次，如仍为疑似，经30～45d再次复检，如仍为疑似可判为阳性。 免疫与治疗 结核病的免疫是带菌免疫，即所谓传染性免疫 (infection imnunity)，当结核杆菌在机体消失或死亡后，其免疫也终止。人类广泛采用卡介苗免疫接种，免疫期达4～5年。犊牛在1月龄时也可皮下接种卡介苗100mg，20d产生免疫，可维持12～18个月。接种卡介苗的牛一年后仍维持变态反应阳性，在用结核菌素检疫时无法与自然感染牛区别，因而不宜推广应用。 按规定，饲养牛群不接种卡介苗，每年春、秋需进行检疫，结核菌素变态反应检测阳性者，要隔离饲养。鉴于抗体产生与结核病的正相关性，在检疫时如能将变态反应与ELISA结合进行，可提高检出率。对检出的患结核病动物要扑杀处理。 由于本菌富含糖脂，造成DNA分离的困难，从而影响了本菌的分子水平的研究