51 DNA的粗提取和鉴定.ppt

小结 1、DNA的粗提取与鉴定的方法 2、原理 3、实验设计的步骤，原则 四.结果分析与评价 可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质 （二）分析DNA中的杂质 （三）不同实验方法的比较 ①选取不同的实验材料， ②同种材料采用不同方法，多方面比较实验结果，如DNA纯度、DNA颜色、二苯胺显色深浅等，看哪种实验材料或提取方法的效果更好。 观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备 （一）是否提取出了DNA 练习 1、请解释提取DNA的实验操作中主要的步骤的目的。 第一步：材料的选取（DNA含量较高的生物材料）； 第二步：DNA的释放和溶解（实验成功与否的关键）， 要尽可能使细胞内的DNA全部溶解； 第三步：DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶 及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将 DNA与杂质分开； 第四步：对DNA进行鉴定。 2、你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取DNA一样容易吗？ 答：提取蛋白质比提取DNA的难度大。 这是因为，与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有一种统一的方法，只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。 2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L和0.14 mol／L对DNA有何影响? 1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA B 答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出 3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色 4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液? 答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。 D 作业 尝试用植物细胞（如新鲜的菠菜）来做这个实验。 方案２：以菜花为实验材料进行DNA粗提取 实验原理： １、 DNA对蛋白酶、洗涤剂的耐受性强,细胞膜的耐受性差. ２、 DNA不溶于冷酒精中 ３、 DNA在盐溶液中溶解 4、DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，或DNA遇甲基绿呈绿色,因此，二苯胺和甲基绿都可以作为鉴定DNA的试剂。 * 复习巩固: (1)如何观察DNA和RNA在真核细胞中的分布情况? (2)真核细胞DNA的主要存在场所? (3)证明DNA是遗传物质的三个经典实验? (4)DNA分子双螺旋结构模型的提出者是谁? (5)DNA分子双螺旋结构模型的主要特点? 1、DNA分子由两条链组成,这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构. 2、DNA分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接.排列在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧. 3、DNA分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对. 课题1 DNA的粗提取与鉴定 课题目标: 了解DNA的理化性质 理解DNA的粗提取以及DNA鉴定的原理 重点难点: DNA的粗提取和鉴定的原理 1、你所知道的生物大分子有哪些? 2、如何来提取生物大分子? 3、提取DNA的基本思路是什么? 4、可以将DNA溶解于水和其他物质分离开来的方法吗? 学生活动1: 一、基础知识 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2.提取DNA的基本思路 提取DNA，去除其他成分 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等 在物理和化学性质方面的差异 ⑴ DNA的溶解性 ⑵ DNA不溶于酒精溶液 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 3.DNA等大分子的理化性质 ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一