G－蛋白偶联受体自身抗体与心脏结构和功能活动的关系-研究生循环生理课.ppt

G－蛋白偶联受体自身抗体与心脏结构和功能活动的关系 ? 受体的定义、分类、发展简史 受体 (receptor)的定义 ? 是细胞中直接地、特异地接受细胞间和细胞内化学信号的大分子。 ③ 受体研究的基本方法 受体的研究方法概述 受体的放射配体结合测定 受体功能分析方法 如何进行受体特性的研究?试举例说明. 了解所研究的受体密度在所研究器官或细胞的分布； 阐明该受体激动时的表现及信号转导通路； 研究该受体的临床意义： 第一步：引言 受体结合特性的研究（Bmax, kd）； 受体功能特性的研究； 第二步：研究内容与方法 第三步：研究目的 如何证明抗受体抗体对相应受体的作用？ 抗体对受体结合特性的影响 抗体对受体功能的影响 抗体对受体下游信号转导途径中，关键信号分子的影响 如何证实这些影响？ 在未被激活前，Gα与GDP相结合，Gα、Gβ、Gγ组合成一体处于无活性状态（G-GDP）； 一旦配体与受体结合后，受体构象的变化可诱导G蛋白中的Gα与GDP脱离而与GTP相结合，呈激活状态（Gα-GTP）； Gα-GTP即与Gβγ分离，转而与效应器如AC相结合并激活之。 随之，存在于Gα结构中的内在GTP酶将GTP水解成GDP，使之成无活性的Gα-GDP； Gα-GDP又与Gβγ结合成无活性的三联体GDP-GαGβγ 方 法 METHODS ? β1-受体和M2-受体抗原多肽主动免疫大鼠模型 ? 选用健康Wistar大鼠90只分成三组： 对照组(n=30) ?1-受体肽段免疫组(?1 组，n=30) M2受体肽段免疫组(M2组，n=30)； ? 每月免疫一次 (抗原用量均为0.4μg/kg)； ? 连续免疫18个月。 方 法 METHODS ? 血清自身抗体的测定 上述三组大鼠均于免疫前及每次加强免疫前1天取血样，分离血清，用SA-ELISA方法测定其血清抗?1-受体及抗M2-受体自身抗体的效价，测定方法见第一部分。 方 法 METHODS ? 在体心功能的测定 免疫后第6、第12、第18个月分别测定体左室功能，测定方法见第二部分。 方 法 METHODS ? 外周血T淋巴细胞亚群的测定 分别在处理前与处理后的第1天、第2天、第3天、第7天、第14天、第1个月、第3个月、第6个月、第12个月、第18个月，用流式细胞仪技术测定三组大鼠外周血中T细胞亚群的含量，并计算各亚群占T细胞总数的百分比 方 法 METHODS ? 形态学指标的测定内容 在处理前与处理后的第6、第12、第18个月，分别进行心脏重量与体重的比值，左右心室的解剖学测量（测定方法见第二部分）、光学显微镜检查、电子显微镜检查等。 方 法 METHODS ? β1-受体和M2-受体抗原多肽主动免疫大鼠模型 ? 血清自身抗体的测定 ? 在体心功能的测定 ? 外周血T淋巴细胞亚群的测定 ? 形态学指标的测定内容 ? β1-受体及M2-受体与特异性放射配体的结合特征 ? 乳鼠心肌细胞培养 ? 心血清抗体的阳性率和滴度 ? 外周血T细胞亚群的变化 ? 心功能变化 ? ?1受体和M2受体密度与亲和力的改变 ? 心脏体视学指标的改变 ? 心肌细胞电镜变化特点 心肌形态学变化及大体病理学心功能变化心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系抗体阳性率的变化抗体滴度的变化自身抗体产生的时间过程抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS 心肌形态学变化及大体病理学心功能变化心肌重构与心脏受体自身抗体产生的关系抗体阳性率的变化抗体滴度的变化自身抗体产生的时间过程抗体生物活性的检测 结 果 RESULTS Fig 1. Intensities of IgG-isotype immune response of sera as expressed by optical density (O.D.) on ELISA from immunized with ?1-adrenoceptor peptide and control rats from 1 to 18 months at dilution of 1