12-洁净区(室)沉降菌测试标准操作规程.doc

文件名称 洁净区（室）沉降菌测试标准操作规程 文件编号 起 草 人 审 核 人 批 准 人 起草日期 审核日期 批准日期 颁 发 人 生效日期 修订日期 发放部门 药检室 目的：建立一个洁净区（室）沉降菌测试的标准操作规程，以规范沉降菌的测试工作。 范围：洁净室和洁净区，无菌室或局部空气净化区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测试和环境的验证。 责任：药检员、药检室负责人。 内容： 4.1 本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 4.2 仪器 仪器包括： a）培养皿； b）培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基； c）恒温培养箱； d）高压蒸汽灭菌器。 4.2.1 培养皿 一般采用φ90mm×15mm规格的培养皿。 4.2.2 培养基 按培养基要求加水，加热融化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20mL至无菌平皿（φ90mml))中。加盖后在室温放至凝固。制备好的培养基平皿宜在2℃~8℃保存，一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。 4.2.3恒温培养箱 必须定期对恒温培养箱进行校验。 4.3测试步骤 4.3.1 测试前培养基表面必须严格消毒。 4.3.2 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。 4.3.3 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。 4.3.4 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 4.3.5采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30℃~35℃培养箱中培养，时间不少于2d。 4.3.6每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。 4.4 菌落计数 4.4.1用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。 4.4.2若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 4.5 注意事项 4.5.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 4.5.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。 4.5.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 4.5.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 4.5.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 4.6 测试时间 4.6.1 在空态或静态测试时，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始，或在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。 4.6.2 在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。 4.7 沉降菌菌落数计算 4.7.1 采样点数量及其布置 4.7.1.1 最少采样点数目 面积m2 洁净度级别 100 10000 100000 300000 10 2~3 2 2 2 ≥10~20 4 2 2 2 ≥20~40 8 2 2 2 ≥40~100 16 4 2 2 ≥100~200 40 10 3 3 ≥200~400 80 20 6 6 ≥400~1000 160 40 13 13 ≥1000~2000 400 100 32 32 ≥2000 800 200 63 63 注：对于100级的单向流洁净室（区），包括100级洁净工作台（bench），面积指的是送风口表面积；对于10000级以上的非单向流洁净室（区），面积指的是房间面积。 4.7.1.2 采样点的位置 a）工作区采样点位置离地0.8m~1.5m左右（略高于工作面）； b）可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。 c）2两点采用左右摆布，三点采用左中右摆布。 4.7.2采样次数 每个采样点一般采样一次。 4.7.3 采样注意事项 4.7.3.1 对于单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流方向；对于非单向流洁净室（区），采样口向上。 4.7.3.2 布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口。 4.7.3.3 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动。 4.7.3.4 应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染。 4.7.3.5 培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，宜同时进行对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿一起放入培