第三章真菌生物学检验基本技术方案研究.ppt

第三章 真菌生物学 检验基本技术;第一节 概 述;真菌的形态;多细胞真菌的形态构成;鹿角状菌丝　;　大分生孢子　小分生孢子;大分生孢子;真菌孢子和细菌芽胞的区别;（二）培养特性;真菌菌落类型;（三）变异性;（四）抵抗力;二、致病性与免疫性;2.条件致病性真菌感染： 主要是内源性感染（如白色念珠菌），亦有外源性感染（如曲霉菌）。 条件： 慢性消耗性疾病。糖尿病、白血病、长期应用化疗、皮质类固醇激素的患者。免疫力低下，菌群失调。;3．过敏性真菌病： 由真菌性过敏原（如孢子抗原）引起过敏症，如哮喘，变态反 应性肺泡炎和癣菌疹等。 4．真菌毒素中毒症： 侵犯害肝、肾、脑、中枢神经系统及造血组织。如黄曲霉毒素、某些镰刀菌素和黑葡萄穗素。;（二）免疫性;三、微生物学诊断;1．不染色标本的直接镜检： 直接采取标本制片、显微镜下直接观察，若发现真菌菌丝或孢子存在时，即可初步判定为真菌感染。 1）标本制备： 2）检查方法： 3）封固液：;①KOH溶液：本液适于检查致密的难以透明的材料（如毛发、指甲、鳞屑等）。 ②墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌（如新型隐球菌等）。 ③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。 ④生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。 ;注意事项 ①采取部位要恰当。深部真菌感染可采取脓汁、痰液、血液、脑脊液等。浅部真菌感染，应刮取病变部位边缘的痂、鳞屑。发癣应取折断的病发等。 ②标本应新鲜。特别是深部真菌标本，尽量在取材后立即检查，最长不得超过两小时，如不能立即送检则必须放入冰箱中保存，尽速送检。;③应在用药前采集标本。如已用药则需停一段时间药后再采集标本。 ④标本的采集量要充足。血液和脑脊液不得少于5ml，胸腔液不得少于20ml。活体组织要采取两份，一份送病理科检查，一份送镜检和培养。 ⑤避免污染杂菌。必须进行严格的无菌操作，必要时在培养基内加入抗生素类。;2．染色标本检查： ⑴革兰氏染色： 各种真菌均为革兰氏阳性，为深蓝色。常用于酵母菌、白色念珠菌、孢子丝菌、诺卡菌及组织胞浆菌等。 ⑵乳酸酚棉蓝染色 ⑶糖原染色：菌体均染成红色。用于标本直接涂片及组织病理切片染色。 ⑷嗜银染色（GMS）：染成黑色。 ;⑸粘蛋白卡红染色法（MCS）： 主要用于新型隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。 ⑹荧光染色： 主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。;菌 种;（二）培养检查; 小培养法：小培养法是采用真菌培养板或普通载玻片进行真菌培养。培养物可直接于显微镜下检查，也可经染色后观察。;（三）免疫学试验;四、防治原则;第二节　浅部真菌;一、生物学特征;角层癣菌 枇糠状鳞斑癣菌可引起汗斑;皮肤癣菌 含毛癣菌、表皮癣菌和小孢子癣菌三个属，主要侵犯角化的表皮、毛发和指（趾） 甲，引起皮肤癣病，包括手足癣、体癣、灰指甲、头癣等。;二、检验方法;皮下组织感染真菌 包括着色真菌和申克孢子丝菌。着色真菌可引起着色真菌病、肢体橡皮肿等；申克孢子丝菌可引起孢子丝菌下疳, 也可引起深部感染。;取毛发、皮屑、甲屑等标本，用70％乙醇消毒，接种沙保氏琼脂斜面培养基，25℃，7-14天。根据菌落形态及颜色、并挑取菌落镜检菌丝及孢子的特征进行鉴定。;本法主要用于头癣检查。病发在滤过紫外灯照射下可发出不同色泽的荧光，如黄癣菌病发呈暗绿色荧光，白癣小孢子菌属的病发呈亮绿色荧光等。;第三节　深部感染真菌;①致病性真菌 正常人体内部不存在，一旦侵入机体，即可致病，如组织胞浆菌、球孢子菌、芽生菌等。属外源性感染致病菌； ②条件致病性真菌 是人体正常菌群的成员，当机体抵抗力和免疫力下降时可致病，如新型隐球菌、白色念珠菌、曲霉菌和毛霉菌等。;一、白色念珠菌;（一）生物学特性;（二）致病性和免疫性;白假丝酵母菌;（三）检验方法及鉴定;⑴芽管试验：取少许待检的白色念珠菌接种于0.5ml人或兔血清中，混匀，直37℃水浴2-3h后，取出一接种环菌液，涂片、镜检。有芽管产生者为白色念珠菌，其他念珠菌不产生芽管。 ;⑵TZC试验：将菌接种于含0.005％氯化三苯基四氮唑的沙保培养基中，经22-25℃，24-48h培养。白色念珠菌不变色或仅为淡红色，其他念珠菌或酵母菌呈红色或深红色。 ⑶糖发酵和糖同化试验：根据这两种试验可将常见的几种念珠菌进行鉴别。 糖同化试验：①将1%的各类糖浸入直径6-10mm的4号新华滤纸片。②将纸片干燥后放-20℃备用。③制备无营养成份的固体琼脂平板（9-12cm）。④将0.5浊度待检菌均匀涂布于以上平板上，贴上不同的以上含糖纸片。35℃，24-48h。⑤若某糖纸片四周有明显的细菌生长，则为此糖同化试验阳性。;⑷动物实验：