型别检测PowerPoint97-2003幻灯片PPT.ppt

HPV检测在宫颈癌诊治中的应用 胡飞红 在2003年，香港天后级艺人， 梅艳芳身患癌症，在她刚刚过完40岁生日后离开人世 宫颈癌与HPV关系 豪森，德国人， 2008年10月诺贝尔奖获得者 研究了人乳头状瘤病毒与宫颈癌的关系 HPV型别与宫颈病变 HPV病毒通过皮肤表面的微小创口侵入 更多的HPV病毒侵入到创口周围组织并进入上皮细胞 病毒复制 常用HPV检测方法的分析 1.细胞学检查 传统巴氏涂片（CV） 液基薄层细胞学技术(TCT) 2.组织学检查（肉眼观察。阴道镜观察。组织检查） 3.感染组织中HPV蛋白的检测 4. HPV感染的血清学检查 检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。 检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。 HPV基因检测 5. HPV基因组检测 1. 基于PCR靶向扩增 2. 基于PCR产物分析,杂交分析 1。基于PCR靶向扩增 2.基于PCR产物分析 2.基于PCR产物杂交分析 （4）基因芯片技术 杂交捕获法 杂交捕获一代（HC-Ⅰ)试验可检测9 种高危型HPV ,包括16 、18 、31 、33 、35 、45 、51 、52 和56 。所用的反应载体是试管； 杂交捕获二代试验(HC－Ⅱ)原来的试管法改为96 孔平板法，能同时检测13 种高危型HPV (16 、18 、31 、33 、35 、39 、 45 、51 、52 、56 、58 、59 和68) 。 杂交捕获法 捕获杂交法（通过对病毒DNA解链,杂交捕获,光信号放大获取结果） 基本实验步骤如下： 1. 样本DNA 双链被释放并分解为核苷酸单链; 2. DNA 单链与RNA 探针结合为RNA－DNA 杂交体; 3. 特异性抗体将RNA－DNA 杂交体固定在试管壁或微孔壁上; 4. 结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNA－DNA 杂交体结合,使信号放大; 5. 碱性磷酸酶使酶底物发光,判读光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA－DNA 杂交体的含量。 HCII唯一通过FDA批准可在临床使用的HPV技术 DNA裂解 → RNA-DNA杂交→ 抗体捕获 → 化学发光 → 计算机判读 豪森，德国人，2008年10月诺贝尔奖获得者，研究了人乳头状瘤病毒与宫颈癌的关系 * 感染HPV病毒到发展成浸润癌需要大约十年的历程，这是重要不可忽视的时间，只要定期进行妇科健康检查，就可以及早发现子宫颈癌癌前病变并加以治疗，就可有效地扼制其癌变;预防子宫颈癌的发生。 * 暴露宫颈，用专用采样刷，置于宫颈口鳞-柱交界处，顺时针旋转4-5周以采集足量的上皮细胞标本，然后将宫颈刷头部放入西托管中，折断刷柄，旋紧盖，标记送检。 * 基本实验步骤如下： 1. 样本DNA 双链被释放并分解为核苷酸单链; 2. DNA 单链与RNA 探针结合为RNA－DNA 杂交体; 3. 特异性抗体将RNA－DNA 杂交体固定在试管壁或微孔壁上; 4. 结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNA－DNA 杂交体结合,使信号放大; 5. 碱性磷酸酶使酶底物发光,判读光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA－DNA 杂交体的含量。 *