学习情境九 微生物的分离、纯化与保藏技术PPT.ppt

学习情境九微生物的分离、纯化与保藏技术;任务一 微生物的分离、纯化技术;微生物纯化、分离的原因;纯培养的过程;一、接种技术;无菌技术(aseptic technique);1. 利用固体培养基分离;1. 利用固体培养基分离;（1）稀释倾注平板法（pour plate method） ;;;（2）涂布平板法（spread plate method） ;涂布 vs. 倾注;(3)平板划线分离法（streak plate method） ;(3)平板划线分离法（streak plate method） 连续稀释的过程;平板划线分离的方法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法;2. 用液体培养基分离纯培养;3. 单细胞挑取分离法 ;4. 富集分离法;附：一些操作技术图片;;倒平板;isolation plate;移接斜面 常用的接种方法 划线接种 点接种 穿刺接种 涂布接种 液体接种 注射接种;;纯化（平板划线法） 倒平板——划线——培养——挑菌落——纯种（纯培养） ;任务二 微生物菌种保藏技术;一、菌种的衰退与复壮的 1.衰退： 菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。 ; 常见的衰退现象： 菌落和细胞形态的改变 生长速度缓慢，产孢子越来越少 抵抗力、抗不良环境能力减弱等 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降 ; 2、 菌种的复壮： 使衰退的菌种恢复原来优良性状; 菌种的复壮措施：纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）； 通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus thuringiensis的复壮） ； 淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较差的已衰退个体）；采用有效的菌种保藏方法。; 3、防止菌种衰退的方法： 控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错配率是5x10-4，自发突变的频率为10-8～10-9，采用良好的菌种保藏方法，可以减少移种和传代的数）；  选择合适的培养条件；  采用不同类型的细胞进行传代（对丝状微生物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种）；  采用有效的菌种保藏方法。; 二、菌种保藏 1、目的：存活，不丢失，不污染； 防止优良性状丧失；随时为生产、科研提供优良菌种??? ;2. 原理 选用优良的纯种（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等） 创造降低微生物代谢活动强度，生长繁殖受抑制 难以发生突变的环境条件（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养等） 添加保护剂; 3.菌种保藏的方法; 方法：①低温保藏法：方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 。原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。②石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。③干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间几至几十年。 ;④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。 ; 干法保藏菌种的方法; 几种常用菌种保藏方法的比较;