第7章细菌感染的检测方法与防治原则PPT.pptx

第七章细菌感染的检测方法与防治原则张文原生物学与免疫学教研室 本章重点与难点细菌感染性标本的采集原则细菌感染的实验室检验程序常用的血清学诊断方法适应性免疫的获得方式人工免疫的概念和常用的免疫制剂细菌感染的治疗原则第一节 细菌感染的实验诊断细菌感染的实验室检验方法细菌培养、形态学检查生物试验、血清学鉴定动物试验、药物敏感试验含菌标本细菌分离培养与鉴定凝集试验、免疫荧光技术酶免疫技术、免疫印迹试验等抗原检测细菌成分检测可疑细菌感染核酸杂交、PCR16S rRNA基因序列分析基因芯片等核酸检测直接凝集试验乳胶凝集试验补体结合试验ELISA等血清（双份）标本特异性抗体检测形态学检查标本运送 标本采集 做好标记置于密闭容器内尽快送检早期采集无菌操作 选感染部位最佳时间采集双份血清 一.临床标本的采集与运送原则二、细菌的检测（一）细菌的形态学检查暗视野显微镜相差显微镜主要用于检查在生活状态下细菌的动力及其运动情况不染色标本革兰染色大肠埃希菌（革兰染色阴性）葡萄球菌（革兰染色阳性）(二) 细菌分离培养与鉴定细菌检查的一般程序脓/痰/尿涂片、染色、镜检生化反应血清学鉴定药敏试验动物实验标本分离培养纯培养血、脑脊液等增菌细菌的分离培养培养基的成分pH培养时间温度气体环境在血平板上的肺炎链球菌菌落生化试验 肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应血清学鉴定利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌对细菌进行种、群、型的鉴定沙门菌血清学鉴定摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社药物敏感试验纸片扩散法、稀释法、E-test法……最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）能够完全抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration, MBC）能够杀死培养基中细菌的最低药物浓度纸片扩散法含有定量抗生素的纸片贴在已接种待检病原菌的琼脂平板上，纸片上的抗生素向周围琼脂中扩散，形成了逐渐减小的药物浓度梯度。由于致病菌对各种抗生素的敏感程度不同，在药物纸片周围便出现抑制病原菌生长而形成的大小不同的抑菌环。根据抑菌环的有无和大小来判定试验菌对该抗菌药物耐药或敏感。稀释法以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓度。 稀释法琼脂稀释法——使用琼脂培养基肉汤稀释法——使用肉汤培养基 抗生素连续梯度法（E-test法）将稀释法和扩散法的原理相结合，使用预先设定的稳定且连续的抗菌药物浓度梯度，采用琼脂培养基培养以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌浓度（MIC）。自动微生物鉴定及药敏分析系统将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液，放入自动微生物鉴定及药敏分析系统中，通过计算机自动扫描、读数、分析、最后报告鉴定及药敏结果。摘自 《临床微生物检验》（第五版）人民卫生出版社自动微生物鉴定及药敏分析系统微生物数码鉴定原理系统组成计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和测试卡（板）、菌液接种器、培养和监测系统、数据管理系统自动微生物鉴定及药敏分析系统药敏检测原理性能特点微型化的肉汤稀释试验根据CLSI标准得到相应敏感度：敏感、中度敏感和耐药自动化程度较高、检测速度快、可鉴定细菌种类及药敏试验种类多、数据处理软件功能强大、结果准确可靠用已知抗体检测待检标本中未知的颗粒性抗原。凝集试验IgG的Fc段与金葡菌的SPA结合，Fab段与细菌抗原结合后，可使金葡菌发生肉眼可见的凝集现象。协同凝集试验用已知的荧光抗体检测待检标本中的未知抗原，借助荧光显微镜观察。免疫荧光技术利用双向琼脂扩散与电泳技术相结合的方法。由于电泳和电渗作用，抗原向正极移动，抗体向负极移动，在比例合适处形成肉眼可见的沉淀线。对流免疫电泳酶免疫技术用酶标记的抗体检测特异性可溶性抗原的实验技术。（三）细菌抗原的检测（四）细菌核酸的检测PCR（含RT-PCR、real time PCR等）核酸杂交技术16S rRNA基因序列分析基因芯片技术（五）生物芯片技术将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上，在一定的条件下进行生化反应。用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果，通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。三、细菌感染的血清学诊断用已知的细菌或其特异性抗原检测病人血清或其他体液中的抗体及其效价的变化，可以作为感染性疾病的辅助诊断。由于本实验多采取病人血清检测抗体，故常称为血清学诊断（serological diagnosis）。一般适用于抗原性较强的细菌，以及病程较长的感染性疾病。也可用于调查