细胞培养技术进阶教程PPT.ppt

细胞培养技术进阶;细胞培养技术;1、细胞原代培养;2、细胞生长状况的观察;1、培养液PH值（颜色变化）;(2)细胞系(株)换液:;3、微生物污染：;细胞培养的污染和检测; 细菌培养液被洋葱佰克霍尔德菌污染了。 洋葱佰克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，是植物病原菌。 ;白色念珠菌污染 ;真菌感染;支原体污染电镜照片, 煎蛋状和其他形状 ;3、细胞传代（贴壁细胞）：;4. 用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，形成细胞悬液(按顺序)。然后离心沉淀细胞。 5. 吸取1:2-5细胞悬液，接种于新的培养瓶内。 6. 加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。 7. 将后者放入培养箱中培养。 ;4、细胞冻存、复苏和运输;冻存和复苏的原则：慢冻快融;低温保护剂的应用;细胞冻存方法;冷冻保存要点：;细胞复苏方法;细胞运输：;5、细胞活力检测;（1）细胞计数;细胞浓度的计算：;（2）台盼兰排斥染色;细胞数/ml＝（4大格细胞数之和/ 4 ）×104×稀释倍数细胞活力（％）＝未着色细胞数÷总细胞数×100％ ;(3) 四唑盐（MTT）比色法;操作流程： ;注意事项;6、细胞周期检测;流式细胞术PI染色检测细胞周期;;7、细胞凋亡的检测 ; 形态学鉴定;细胞膜结构改变分析;DAPI;Hoechst 染色;PI（Propidium Iodide, 碘化丙啶 ）;Heochst/PI双染;磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法） ;Annexin V/PI双染色法 ;8、细胞凋亡的流式分析;利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。 ;流式细胞仪工作原理;;信号检测--散射光 ;信号检测--荧光信号 ;流式细胞仪检测细胞凋亡常用的三种方法 ;PI单染色法;Heochst 33342/PI双染色法 ;区别正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞：;Annexin V/PI双染色法 ;Annexin V/PI双染色法 ;细胞培养常见问题解答：;3、为何培养基保存于4 °C 冰箱中， 颜色会偏暗红色， 且pH值会越来越偏碱性？ ;4、培养细胞生长减慢可能原因：;;5、培养细胞不贴壁;6、欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？ ;7、培养液pH 值变化太快;培养液中盐浓度不正确 在CO2 培养环境中改用基于Earle′s 盐制的培养液，在大???培养环境中培养改用Hanks 盐配制的培养液 细菌、酵母或真菌污染 丢弃培养物或用抗生素除菌 ;8、培养液出现沉淀，但pH值不变;9、培养液出现沉淀，同时pH 发生变化;10、原代细胞培养物污染;11、支原体(mycoplasma) 污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？