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细胞培养基知识简介 —Bertha 细胞培养用液及培养基 一、培养用液： ?水 ?平衡盐溶液 ?其他培养用液 二、培养基： ?天然培养基 ?合成培养基 ?无血清培养基 水 水是细胞培养所必需的，细胞所需的化学成分、生存环境、营养物质都必须用水溶解才能被细胞吸收。 实验室所用纯化水一般为蒸馏水和离子交换水。细胞培养主要使用蒸馏水，实验室在配制各种培养用液时应使用新鲜蒸馏的三蒸水。 蒸馏水 玻璃蒸馏器制备的三次蒸馏水 尽量减少开启次数 存放时间不宜过长，一般不要超过2周 最好现制现用 平衡盐溶液（balanced salt solution, BSS ） 平衡盐溶液是组织细胞培养中常用的基本液体。它可以维持渗透压、调节pH值及供给细胞生存所需的能量和无机离子成分。主要作为合成培养基的基础液及用于洗涤组织、细胞等。 平衡盐溶液（balanced salt solution, BSS ） 主要是由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。 主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。 Ringer、PBS、Hanks or D-Hanks（无钙、镁离子） 配制离散细胞的消化液和洗涤液时，宜用钙、镁离子含量低的或无钙、镁离子的溶液（以免钙、镁离子的存在降低胰酶的活力，影响消化效果） 可配制成10×浓度的贮存液，用时稀释 高压灭菌，冰箱保存 浑浊或沉淀时，应重新配制 功效：①维持渗透压；②提供缓冲系统；③提供水分和无机盐 要求：①和培养物来源的动物血清相似；②等渗 最简单的BSS是Ringer(1895年)。D-Hank’s与Hank’s的一个主要区别在于前者不含有Ca2+、Mg2+ ，因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液。 配制平衡盐溶液也应当用新鲜的三蒸水。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温高压灭菌。 有浑浊或沉淀时，应重新配制 如： 平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液 PBS：NaCl 8.0 g KCl 0.2 g Na2HPO4.H2O 1.56 g KH2PO4 0.20 加新鲜配置的三蒸水或去离子水水至1000 ml 培养基 培养基就是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质,它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础 细胞培养基的基本要求: 体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。 培养基的分类： 1、天然培养基：即组织提取物和体液。 　　如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。 　 2、合成培养基:需要添加血清培养细胞。 3、无血清培养基 :不需要添加血清就可维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。 培养基中主要的成分包括 ： 1.氨基酸： 精氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、 苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸和缬氨酸 （均为Ｌ型）。 2.碳水化合物：葡萄糖,细胞生长能源之一，主要作为碳源利用。　　 3.维生素：叶酸、肌醇、烟酰胺、吡哆醛、核黄素、硫胺素等。 4.无机离子与微量元素 天然培养基 血清：提供营养和生长因子，促进细胞生长繁殖，粘附及中和有毒物质 血浆：支持培养组织块及供给细胞生长的营养物质，现在不常用 组织浸出液：可用鸡胚胎浸出液，含大分子核蛋白质和小分子氨基酸，能促进细胞生长 水解乳蛋白：氨基酸含量高，由乳白蛋白质经水解得到淡黄色粉末，一般可配制成0.5%溶液。 血清中的主要成分： ① 多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ② 多种金属离子 ③ 激素 ④ 促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、 胶原等 ⑤ 各种生长因子 ⑥ 其它不明成分 血清的主要作用： 　(1)提供基本营养物质 　(2)提供贴壁和扩展因子 　(3)提供激素及各种生长因子 　(4)提供结合蛋白 　(5)对培养中的细胞提供某些保护作用 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：(1)有可能改变某种细胞在体内的正常状态 (2)血清中含有一些物质对细胞会产生毒性作用 (3)每批血清之间都有差别,其成分不能保持一致。 (4)取材过程有可能带入支原体、病毒，对培养的细胞产生潜在影响 (5)直接影响某些实验，如生长因子的检测 人工合成培养基