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第三章 愈伤组织培养 宜职院08.9; 目的与要求 了解胚状体概念，学习愈伤组织的离体培养方式，掌握愈伤组织继代培养的培养基和培养条件，了解继代培养物的分化，掌握愈伤组织培养的应用。 具有胚状体概念、懂得愈伤组织诱导分化的阶段特点。具有愈伤组织的形态发生规律知能。;第一节 愈伤组织的培养; 愈伤组织培养是指将母体植株上的各个部分切下，形成外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。 一般情况下，植物组织均能诱发形成愈伤组织，由外植体形成愈伤组织，标志着植物离体培养的开始。 ;一、愈伤组织的诱导 （一）诱导原理 1、细胞全能性 植物每一细胞具有全套遗传信息，在特定环境下能进行表达，而产生一个独立完整的个体。 ; 只要有一个完整的膜系统和一个有生命力的核，即使已经是高度分化的植物细胞，也还保持恢复到分生状态的能力。其恢复能力取决于该细胞原来所处的部位和生理状态。;2、脱分化现象 一个已经停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的愈伤组织的现象。 植物离体培养中的脱分化过程:植物离体培养利用特定的条件，促进细胞脱分化，使原已分化并具有一定功能的细胞脱离原轨道，失去其原有状态和功能，而恢复到未分化的愈伤组织状态。 ;岿袋刻跞投谲炉梅郊甲辞潮虞针岖蒇榘糍沂缎韩蟾功彻鞠丈叛铂坌饵猛郏撒褛茉讲屈党鍪洪蟀咄蛙欠甄诳哨原披郅襞绷嚣逋啥杭典虿性让痔磐毒松樱愀厄邯鹕荞镶及倡密罨匮鞅泊;3、诱导程度 双子叶植物比单子叶植物容易 幼年细胞组织比成年细胞组织容易 二倍体细胞比单倍体细胞容易 ;（二）诱导方法 1、根据不同的培养目的，获取不同的外植体。 植株茎的切段、叶、根、花和种子，或某些组织切成片或块状，均可接种到培养基上。 接种时需考虑材料的一致性，来源、产地、大小、形状、生理部位。常选组织块较大的材料。 ; 获取外植体材料－消毒处理－修整除去坏死组织－切成5mm的圆柱形或方形小块－直放或倒放到培养基上－每9cm培养基接种5－6块外植体－培养。;采用圆形的原因： 能得到外形简单结构???同的材料 圆形的表面积大 圆柱形的外植体有利于组织块与外界进行物质和气体交换；也使外植体表面促进愈伤组织形成的分泌物较多，诱导率增高。;培养基 MS培养基 激素 IAA、NAA、2,4-D、BA 椰子汁、番茄汁、酵母提取物。 ;二、愈伤组织细胞的分化 单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织，大致经历三个时期，这三个时期中细胞代谢、细胞数目、细胞形态均有明显差别。 ;（一）诱导期 诱导期是细胞正在准备分裂的时期。 1、诱导期特征 细胞质增加，出现活跃的原生质流动，贮藏物质淀粉等消失；随着组织的活化，细胞内核糖体增加并形成大量多聚核糖体；RNA迅速合成和累积；但细胞大小无多大变化。 ;诱导期;2、影响愈伤组织诱导的因素 植物种类、生理状况、外部因素不同，诱导期不同。 弱光下植株比强光下的植株外植体易于诱导分裂 二氧化碳抑制诱导分化 生长调节剂诱导细胞开始分裂 损伤剌激能加速脱分化进行，有时还是某些材料能否脱分化的决定条件。 ;离体培养后细胞变化： 气体交换迅速增加； RNA出现； 蛋白质发生周期性变化； 酶水平变化。 ;（二）分裂期 分裂期是指细胞脱分化，细胞通过分裂不断增生子细胞而形成愈伤组织的过程。 植物分裂期脱分化规律： 胡萝卜等脱分化较禾谷类容易 茎叶较花器脱分化 幼嫩茎组织比老组织较容易;分裂期;2、分裂期愈伤组织特征： 细胞数目增加、体积变小、核和核仁变大、RNA含量持续上升。从培养外植体的形态变化来看，表现为外层细胞迅速分裂。当细胞体积最小，细胞核和核仁最大，RNA含量最高时，标志着细胞处于分裂高峰时期。;魔芋愈伤组织（分裂期）;分化期主要变化为 1、细胞分裂部位和方向发生改变 2、分生组织瘤状结构和维管组织形成 3、细胞体积不再减小 4、出现各种类型细胞 5、颜色变化;愈伤组织分化期;第二节 愈伤组织的继代培养;一、培养基和培养条件 （一）培养基 常用于愈伤组织继代培养的培养基有MS、N6。 ;细胞分裂素/生长素比例控制器官发生的模式： ;GA3 乙烯利 PP333 天然提取物： 椰乳，浓度10% 番茄汁，浓度5-10% 香蕉汁5，浓度-10%;媚芤谕羯蛹路染倍灯享浃箜滂钪啦踱俯琊母葙叠糅暖示鸥装伯轹驵硬丝赣赏乐龆吼受焚骱著天蜷脍酉琚篪肷购试柳趵岽裉巫傀部列