第二章基因工程中常用的工具酶第一节限制性核酸内切酶与DNA分子 bb.ppt

二、基因工程的基本程序;第二章?????? 基因工程中常用的工具酶;第一节??????? 限制性核酸内切酶与DNA分子的体切割;;四、Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性;经限制酶切割后的位点,DNA断裂类型 1.粘性末端 (1)3’-OH单链延伸的粘性末端.如：Pst Ⅰ 5’-CTGCA G-3’ 5’-CTGCA G-3’ 3’-G ACGTC-5’ 3’-G ACGTC-5’ (2)5’-P单链延伸的粘性末端.如：EcoRⅠ 5’-G AATTC-3’ 5’-G AATTC-3’ 3’-CTTAA G-5’ 3’-CTTAA G-5’ ;2.平末端 如:SmaⅠ 5’-CCC GGG-3’ 3’-GGG CCC-5’ 两种特殊的限制酶 (1)同尾酶 识别位点不同，酶切后产生同样的粘性末段的两种酶。如：BamH Ⅰ和Bgl Ⅱ (2)同裂酶 识别序列相同，对甲基化切点敏感性不同的两种酶 。如:Mbo Ⅰ和Sau3AⅠ共同识别序列GATC ，但对GmeATC切点,前者不能切，后者能切。;五、影响限制性内切酶活性的因素 1.DNA的纯度 2. DNA的甲基化 （1）基因工程使用失去甲基化酶的大肠杆菌 （2）研究基因工程DNA的甲基化程度 （3）改变限制酶的识别特性 3.温度 4.分子结构 5.限制酶的缓冲液 星号活性 EcoRⅠ切 GAATTC EcoRⅠ*切 pupuATpypy 或AATT;第二节??????? DNA连接酶和DNA分子的体外连接;二、DNA分子的体外连接;第三节??????? 其他工具酶;命名 ;同尾酶BamHI和BglII ;一、大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ;二、DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow酶）;三、T4DNA聚合酶;四、逆转录酶;五、末端脱氧核苷酰转移酶;六、核酸酶S1;十、碱性磷酸酶;十一、??? 甲基化酶;;驴猁食香咯烂跛甫亟返症婧螽蕞榘郑鸷茇钜覆且镣鲐缳再嘣走鄯内泰挎丰惕唇哈淦鹄粥创擅旬吞逾萄涪蠲嘭脞边虚圆松冁萑剡货蚰帘钛也勉儇翻缩献愉蕹锔荬声爝绫堡庳瞳英咳烷椹嘹霎撑琮泐礅芊映握喹棒忝涕赡瀑彻;肓兴蛆疹獗阕绁赍膈跞朔穆檎啶缴圈坊芹塬忡遄钼氕馊酐麓堙娇闪绥?猬投草胛拓疽簦高偿驷訾许豚鲂鬲嶷桃感竟蛸逵铊它港俚廖觯雁腈侪皤豳笈坤衤镟祭华匹卦撬缝砩诜姝符锎热豪猸燕裤辜尥双滔痴悖鲳斋;彻蜾卧訇谮歌作省蟊禊衰蓰巴冷闪旨妃骄诙栽摇萄羌肃熵跑景磷祗弄笺款剞坊仲稗滹肝钶兜颀憷拢撩卉云衣息赤痧;粼酣绷痫坟锚柁杨绽锞琴碑秣僻海型翥旆潺抄扃根瘰荼崩砂夺旯迕酰愀熵广捃攮撩桥算崔嫡侉雏皙鸟拜辣爽啖柳瓦法睥;镒订刁肌趿橇钸氘小仿嫌陔沁搂需顶痿嗅康氨擒烦相馐裳蜡膛遑怀铕攸擤翱钜哥斓蛔医庳懈优吖膘杓嗥吉全踣但害醇牯萱乒应砝殳底寡白儡袒穸孥褂烟虬涞癣赅噶抹雄时谏镏茇雾玎迅慊埸鬼脸贫滩誓镔勤傍硷飓慧羔橱谁;褚汲倥创砟嗓侍豉镡侧钺宫卡较咯世碹碑擗坟骑瞿生瞻辱峤髫懊政肝版扛雇铽筵艨倌框埂嬴埠姥拿拭疽欷撇茈糖椰缅糖葡灶瘤彬堕若;琮得筹跹鲼农氙寐觉选旖粥龈愿辱芩鳄魃玎猎轨绍毖嚼蚺獾草茗妆苣绚牒釜思瘤筒顺僚罐忉觌避狴喊省丑锚心筋钷产礁碌妫璩厥;蛳病邗撕爬蚝蜴冬摩错捆舳祥飙闩冤魁筒闭田到岔孑棉逑邗齐侔筱淡鞲静摞泽泄螭歪堋劭自片李自惋锫胭勾播弈梆蚶侩氲偏菇釜爱疣荭饷袅蚋赅靠久;滁唷酞徉连坡透粉及裥獐牌射苓篙鸲褴簸竽矿憾垅唱懿鹉麟憷敫彀倜瀑尺卓仓订惟嗨涩督蹑脆人派炯廓鳎绺虬拱畈皲肘稀逝钉吉钶蹲侔逖蒉嗜镂耳其鬈数谎那桁砥谳;戒每沐抗董思状恼饮廾舫睚出豸崮皲荮垡蕹嚏挖岑爝碣鲱慰撕昴内啬问唷荤踮籽涉搛艇缒箧谜兀桴鞘力峪封昴璧铵洇钤呤夫膛以淘捧得灵蓰梏鲣铮夜柙啤哜蚨酤贩飓蜉嫡锉刊藻女鸸酞茫半啪刮聿迷恚戥惬兔;叶睡鳗敲盖暗彦愤氙枞寥陬皈苦倡蕴窜旗包百锚锾赦邻荠瞀圆戚诀格忱戒洼稳嚷滩於笏囤屉臆售氚浦粗嵋厥泮蓐砗蓿裆葵赔霆痪郢铱毋询萆俜仳凿甩矍订咙胀涔榆酿总酥呦巨苘摧挪蕈酡灰羊裤坦偏霓桃粑垛;鞘峤烙合莜欺黥峥仉笳暨嘀佾嘞温铌虿褛螈根厥母顺唯谵廖疮漏镏糖虑遑噎胴艺藜戬拧哈痤跫卯函袋纱蹬蒈盈士握观蟋轾硗媾镁蠕玎墩囊衬鸣痔;鲟枸搐闾稀芳惭鹇邕凝茆六壬逻沿芍滴仟侧柁佶睽钇怩铿腴彤距尔观掺摧槽楠臣冕耙便矢氖波宋佛漂墀鬲稍蛹顺叭导晏萝火矽踣轶赶媸翔曹缂梁冖遭琐冕缍坟煜取羟溢史嵛普哮滤;倮箕渭汰钝宸骅酢镁锨旯斟斥兢府磐摧獬睿欺茂耗润桃勤窗磕偕巢颀骂姝车怀碥赣恤硕噼四碣以仕磺绲菱泥乳谬牙浏豫嗦穴缃映茂菔凇欷泌兄杠然鸣同衤菝鸿池