第二級安全櫃 - 微生物學系.ppt

研究法 細胞學實驗 學生 黃怡鈞 無菌操作 1.研究人員視需求及實驗性質不同選擇適當之無菌操作台 2.無菌室非使用期間照射UV燈 3.無菌操作台使用前以UV燈照射半小時 4.在操作台內打開(蓋上)器皿為了避免污染均要過火滅菌 (瓶口) ，並且避免蓋口朝上暴露於空氣中過久，手勿通過開 蓋之器皿上方，吸管前端或容器口保持清潔不碰觸物品 5.物品進入操作台前必須以棉花沾酒精擦拭滅菌 6.使用完無菌操作台後必須以酒精棉擦拭檯面並且攜出實驗 物品，並帶走廢棄物收集統一滅菌 7. 實驗時小心操作避免實驗物或藥品灑出並注意桌面整潔 8. 酒精燈使用小心，物品噴灑之酒精未乾前勿過火滅菌， 以免造成危險。 9. 燈中酒精量若只剩1/3 時請添加酒精，熄火後將酒精燈 靜置超過三分鐘，再將酒精燈移至實驗桌上添加，勿在操 作台上添加；勿將酒精裝滿，約裝2/3 滿即可 。 10. 培養箱需注意清潔更換水盤(無菌水 並添加消毒水) 11.定期更換無菌操作台之HEPA過濾膜 12.進行無菌實驗操作者實驗前後洗淨雙手，在進入無菌台 前亦要以棉花沾酒精擦拭，並穿著實驗衣及戴手套 保護自己安全。 無菌操作組織培養基本設備 無菌操作台: 二氧化碳培養箱: 滅菌設備: 實驗室生物安全等級 1.一級實驗室: 最基本的安全防護措施。處理已定性不引發 疾病之活微生物 2.二級實驗室: 中等風險微生物操作人們穿著實驗衣手套 生物安全操作櫃及一般物理防護設備 3.三級實驗室: 進行較為危險致命感染性(氣體)微生物操作 必須在生物安全櫃中或密閉設備中進行實驗 實驗室進出管制及獨立排氣系統 4.四級實驗室: 獨立建築物或有排氣廢棄物處理系統可防止 微生物外洩之單獨隔離區，穿著全身防護衣 進行高危險致命性微生物實驗(配有三級之 生物反應櫃) 實驗室生物安全等級 生物安全等級一： 1.適用於使用之生物不會使健康人致病、對實驗室工作人員及環境具最低潛在危險。 只能處理已經被定性，對健康成人不引起發病的活微生物 (非致病菌) 2.工作可依照標準微生物操作準則，在開放的實驗桌上進行，不需特殊設計的污染防護儀器設施。 3.實驗室無須與其他作業區域分離。一般而言，實驗室工作人員，必須接受實驗操作的特別訓練，並由具備微生物(或相關知識)使用須知訓練的實驗室主管或有相關經驗者所管理。 生物安全等級二： 1.用於中度潛在危險的病原。病原與人類疾病有關，可能有皮膚接觸、誤食及黏膜暴露。如：金黃色葡萄球菌。 承擔的風險為可能經皮膚、黏膜引起危險的微生物 (等級二以上均為致病菌之處理) 2.與等級一差別在(1)實驗室工作人員受過使用致病物質的特殊訓練並由適當的專家所指導。(2)工作進行中需管制門禁。(3)特別小心受污染的尖銳物品。(4)操作步驟可能產生氣霧或濺灑者，需使用生物安全操作櫃或物理性防護設備。 生物安全等級三： 1.可經氣膠傳播之本土或外來病原，會嚴重危害健康。 承擔的風險為可能由空氣傳播感染的微生物 (具有高度傳染性但致死率不高或低傳染性但致死率高) 2.適用於臨床、診斷、教學、研究單位、工作人員必須接受處理致病性及致命生物的特別訓練，並由具經驗之專家監督管理，處理感染性物質的過程需在生物安全櫃中進行，或使用其他物理防範裝置，或工作人員穿配保護性衣著與裝置。實驗室需經特殊設計(如緩衝區、密封通道、定向氣流等)。故需遵守標準微生物操作、特殊操作及安全設備規範才能符合等級三之需要。 3.與第二級差在(1)生物安全櫃中或密閉設備中進行實 驗(2)進出實驗室嚴格管制(3)有獨立的排氣系統降低空染 之危險性 生物安全等級四： 1.適用於可經由氣膠傳播或未知傳染危險之危險生物病原，會引起對生命之高度危機的疾病。如：依波拉病毒。　 實驗室可進行海外來的或不知名微生物會引起個人高風 險對生命具有危險性的目前無藥物或疫苗可用之微生物 (具有高度傳染率與致死率的病原) 2.實驗工作人員必須接受極度危險之感染性物質的特別訓練，需充分了解標準及特殊操作、設備、實驗室的設計特色。並嚴格管制實驗室門禁，所有活動皆限於第三級生物安全櫃中；或於第二級生物安全櫃中，工作人員穿著連身式具支持生命系統通風設備的正壓工作服。實驗室具特殊設計可有效防止微生物散佈至環境中。實驗室設於不同棟或同棟建築內的管制區域，完全與其他區域隔離。 3.與三級實驗室不