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第八章 霉形体 (Mycoplasma ) 夏 春 教 授 中国农业大学动物医学院 预防兽医学 本章重点 霉形体的生物学性状,培养要求与 方法，分离与鉴定步骤。 几种霉形体的致病特点。 概 述 定义 霉形体又称支原体； 是一类无细胞壁的原核单细胞微生物； 多形性，能通过细菌滤器，是目前所知的能够在无生命培养基中生长繁殖的最小能在人工培养基中生长繁殖微生物。 含有DNA和RNA，二分裂或芽生繁殖。 GC低（E.coli 1/5） 主要特征 ⑴ 缺乏细胞壁；三层结构C膜。 ⑵ 在固体培养基上形成油煎蛋状菌落； ⑶ 能通过200-450nm的细菌滤器； ⑷ 基因组富含AT； ⑸ 在任何条件下不能回复为具有细胞壁的细菌. 1, 形态染色 无细胞壁，故具有多形性和滤过性。常呈球状、两极状、环状、杆状和丝状，球状细胞直径在300nm以内。革兰氏染色呈阴性。姬姆沙染色呈淡紫色。 2, 培养特性 营养要求较高 培养基中除基础营养外，需牛心浸液，酵母膏，辅酶 I、氨基酸等，有的需要加10％-20％的动物血清。 为抑制细菌生长，常加入青霉素、醋酸铊、叠氮钠等药物。 培养时间较长 在琼脂培养基上孵育2-6d，才长出低倍显微镜下可见的微小菌落（10-600?m）。 培养条件 有氧生长良好，在5％CO2和95％N2的环境中，生长为佳。适宜温度为36℃。 菌落特征 典型菌落呈“煎荷包蛋状”。可在鸡胚卵黄囊或绒毛尿囊膜上生长，也能在细胞培养液中生长。 “煎荷包蛋状”的菌落 3, 生理生化特性 根据对糖类分解能力，分为两群。一群能分解多种糖类产酸不产气，称发酵型；另一群不能分解糖，称为非发酵型，但能利用精氨酸作为碳素和能量来源。 某些菌株在含血液的培养基中其菌落周围可形成β型或α型溶血。 禽败血霉形体、肺炎霉形体的菌落能吸附禽类红细胞。 4，抗原与分型 主要抗原： 膜蛋白 交叉很少 5, 生 态 自生 热原体是严格自生 共生 专性厌氧的厌氧原体栖息于牛羊瘤胃内 寄生 支原体广泛寄生于人体、动物和植物。 多种支原体能侵染人类和畜禽的消化道、呼吸道、泌尿生殖道和关节等部位，引起各种炎症和流产、不育等。 支原体的粘附能力相当强，营粘附式“外寄生”，很少侵染到血液和组织内。 6, 抵抗力 霉形体对理化因素敏感。对热敏感。对醋酸铊、结晶紫等有较强的抵抗力。 对青霉素、先锋霉素有抵抗作用，对影响蛋白质合成的抗生素如泰乐菌素、强力霉素、红霉素、支原净等敏感。 7, 微生物学诊断 血清学鉴定 生长抑制试验(GIT) 霉形体在固体培养基上生长可被相应的抗血清所抑制，常用圆纸片法。 表面免疫荧光法 (ep-IF) 用已知抗血清制成荧光抗体，直接染色琼脂块上的霉形体菌落，在荧光显微镜下观察菌落的特异性荧光。 代谢抑制试验(MIT) 霉形体的代谢活性可被相应的抗血清抑制。常用的有精氨酸、脲酶代谢抑制试验以及发酵抑制试验。 一、禽类支原体 根据病原性差异，可将禽支原体分为三组： 明显具有病原性 鸡毒支原体 M.gallisepticum ; CRD, 难以根除 ND, E. coli 继发 具有N毒素 滑液支原体M.synoviae; 火鸡支原体M.meleagridis。 在某些情况下具有致病性的支原体 鸡支原体、鸭支原体、莱氏无胆甾原体、尿原体和鹅支原体； 二、猪支原体 猪肺炎支原体 （M. hyopneumoniae） 猪地方流行性肺炎. “猪踹气病” A26培养基 猪鼻支原体 小猪呼吸道，特别是鼻腔的正常寄居菌，某些条件下能从肺组织中发现，主要是起继发性病原菌作用。 猪滑液支原体 引起关节炎 其他动物，如牛、羊、马、实验动物等 * * 亦译为支原体 细胞膜 猪肺炎霉形体例外 “煎荷包蛋状”的菌落 分离培养 将无污染病料用液体培养基稀释，再稀释至10-5-10-6，37℃培养2-7d。初代培养未发生颜色变化时可盲目传代2-3次。初代分离时在含有5％-10％CO2的环境中生长更佳。 固体培养基接种后须置高湿环境培养。 生理生化性状测定 毛地黄苷敏感性测定、葡萄糖、精氨酸分解试验。 直接镜检意义不大