第四节　黄酮类化合物的检识与结构鉴定.ppt

第四节　黄酮类化合物的检识与结构鉴定 目前主要采用的方法有： ①与标准品或与文献对照PPC或TLC得到的Rf或hRf值（Rf?100）　 ②分析对比样品在甲醇溶液中及加入诊断试剂后得到的UV光谱 ③1H -NMR ④13C -NMR ⑤MS ２）聚酰胺层析 适用范围广，可分离含游离酚羟基或其苷类。 常用展开系统：乙醇：水（3：2）；丙酮：水（1：1）等。 （4） 根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟基的取代情况。 氘代二甲基亚砜（DMSO-d6）对鉴别黄酮母核上的酚羟基，是十分理想的溶剂，在试样中加入重水（ D2O）羟基质子信号消失。 当7-OH成苷时，则H-6及H-8信号均向低场方向位移。 2. 双糖苷类 末端糖上的H-1’’’因离黄酮母核较远，受到的负屏蔽作用较小，因而较H-1’’处于较高场的位置。 （2）黄酮类双糖苷及低聚糖苷中糖的联结顺序常采用HMBC(1H-detected heteronucler multiple-bond-coherence)二维核磁共振技术进行确定。 但是当测定极性强、难气化以及对热不稳定的黄酮苷类化合物时，则采用FD-MS和FAB-MS、ESI-MS等软电离质谱技术获得强的分子离子峰[M]+及具有偶数电子的准分子离子峰(quasi-molecularion peak) [M+H] +。 黄酮类化合物主要有下列两种基本裂解途径： 途径-I（RDA裂解）： 120 102 小结：? 第一节 概述包括（黄酮类化合物的结构分类、生物活性） 掌握黄酮类化合物的的定义、基本结构、分类和代表化合物。 第二节 理化性质和显色反应 掌握黄酮类化合物的颜色、旋光性、溶解度的特性及与结构之间的关系，掌握黄酮类化合物的酸碱性，酸性强弱与结构之间的关系及在提取分离中的应用，掌握显色反应与结构之间的关系及应用。 第三节 提取分离 掌握黄酮类化合物的一般提取方法、PH梯度分离法与结构之间的关系，掌握黄酮类化合物聚酰胺柱层析法、硅胶柱层析法和凝胶过滤法的原理以及它们与结构之间的关系 第四节 结构鉴定 掌握黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮、查耳酮和橙酮的母核紫外光谱特征，掌握加入各种诊断试剂的黄酮类化合物的解析规律、熟悉黄酮类化合物检识的色谱方法。掌握黄酮类化合物氢谱、碳谱的基本特征及其在结构鉴定中的应用，熟悉黄酮类化合物质谱的基本特点。 2．苷元的苷化位移 苷元苷化后与糖直接相连碳原子向高场位移，其邻位及对位碳原子则向低场位移，且对位碳原子的位移幅度大而且恒定。 C-5-OH糖苷化后，除上述苷化位移效应外，还因C5-OH与C4＝O的氢键缔合受到破坏，故对C环碳原子也将发生巨大的影响。C2，C-4信号明显地向高场位移，而C-3信号则移向低场。 (四)双糖苷及低聚糖苷中分子内苷键 及糖的联接顺序 （1）当糖上的羟基被苷化时将使该-OH所在碳原子产生一个相当大的向低场位移。 例如在黄酮类化合物芦丁[苷元-O-β-D-glucosyl-(6→1)-α-L-rhamnoside)中，葡萄糖的C6信号将向低场位移5.8，但C-5则向高场位移约1.4。 五、质谱在黄酮类结构测定中的应用 多数黄酮类化合物苷元在电子轰击质谱(El-MS)中因分子离子峰较强，往往成为基峰，故一般无须作成衍生物即可进行测定。 (一)黄酮类化合物苷元的电子轰击质谱  (El-MS) 黄酮类化合物苷元的El-MS中，除分子离子峰[M]+外，也常常生成[M-1]+即(M-H)基峰。如为甲基化衍生物，则可以得到[M-15]+即(M-CH3)离子。 途径-II 此外，还有分子离子M+.生成[M-1]+，(M-H)及[M-28]+.(M-CO)；由A1生成[A1-28]+.，(A1-CO)及B2生成[B2-28]+，(B2-CO)等碎片离子。 1．黄酮类裂解基本规律： 化合物 A1+. B1+. 黄酮 120 102 5，7-二氢黄酮 152 102 5，7，4-三羟基黄酮（芹菜素） 152 118 5，7-二羟基，4-甲氧基黄酮 （刺槐素） 152 132 A-环的取代图式可通过测定A1+.的m/z的值进行确定 。同样，根据B-环碎片离子的m/z值，也可精确测定B环的取代情况。 一些黄酮类化合物的质谱数据 黄酮在有四个以上氧取代基时，常常给出中等强度的A1及B1碎片，它具有重要的鉴定意义；但是黄酮醇则不然，当氧取代超过四个以上时，只能产