细胞因子检测的方法　.ppt

细胞因子及其受体的检测; 第一节 细胞因子检测概述; 由非神经—内分泌细胞产生的一大类与免疫应答活动密切相关的低分子蛋白与多肽。;细胞因子的类型与作用特点;以生物学作用进行划分的分类;TNFs;1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性 2、多源与同源性 3、高效性 4、多效性（pleiotropy） 5、丰余性（redundancy） 6、协同性 7、拮抗性 8、网络性;细胞因子; I L-2 I FN-? TNF-?;IL-4;Th细胞;Th细胞;Th2细胞;细胞因子的网络性;细胞因子检测的特点与方法;细胞因子检测的特点;细胞因子检测的方法; 第二节 细胞因子检测的方法与原理;细胞因子的细胞生物学检测;检测方法与原理;滤膜：计数受趋化细胞;检测中的操作注意要点;靶细胞的选择与培养;各类细胞因子检测的常用靶细胞;各类细胞因子检测的常用靶细胞;检测标本的准备;显示检测结果;直接计数法 简便、直观,但费时、主观因素影响??、难以标准化和自动化 细胞代谢活性测定方法 3H-TdR、125I-UdR掺入法或MTT等比色法 细胞代谢产物测定法 代谢产物荧光强度测定法和指示细胞表面标记或可溶性分子测定法; 通过检测细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。在细胞的增殖过程中，DNA合成的增加使得指示细胞对核苷或碱基的需求增多，若将核苷标记上可以示踪的同位素（3H/125I ），通过检测细胞内的同位素含量，则可反映细胞增殖的程度。;特点：不使用放射性核素， 以细胞代谢变化为增殖指征 指示细胞的增殖情况与线粒体代谢活性相关 ;敏感性较高 特异性不高 操作繁琐 易受干扰;细胞因子的免疫学检测;敏感性偏低 不能判断细胞因子的生物学活性。;ELISPOT;酶联免疫斑点试验(ELISPOT或ElisaSpot) ;细胞内细胞因子检测技术;流式细胞分析法;使用流式细胞分析法，可以：;四、免疫学测定方法学评价;细胞因子的分子生物学检测; 第三节 常用细胞因子的检测方法;待检样品（细胞上清） 指示细胞（CTLL-2）;待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929）;肿瘤坏死因子的测定示意图; 第四节 细胞因子受体的检测; 细胞因子受体的类型;细胞因子受体的检测方法;本章小结