[高等教育]酵母无氧呼吸实验总报告.doc

pH值对酵母无氧呼吸的影响 陈珺，何恩明，李璐，李骁，曾岑，张集川，张晴柔，赵倩茹，周文倩，王劲珩 （复旦大学 生命科学学院09级，上海 200433） 摘要 目前有关pH值对酵母无氧呼吸影响的研究报道较少，在本实验中我们实验小组自行设计了这一探究实验，设置了七个pH梯度，使酵母在其他条件相同时进行无氧呼吸，通过测定发酵一定时间后反应管内剩余葡萄糖含量的多少来表征呼吸强度大小。我们还做了一些对其他发酵条件如发酵时间、酵母量等对无氧呼吸的影响的探究。 关键词 pH 酵母 无氧呼吸 The Impact of pH on Anaerobic Respiration in Yeast Chen Jun, He Enming, Li Lu, Li Xiao, Zeng Cen, Zhang Jichuan, Zhang Qingrou, Zhao Qianru, Zhou Wenqian, Wang Jinheng Abstract: Due to the few reports on anaerobic respiration in yeast, our group designed a series of experiments to explore the relationship between pH and naerobic respiration in yeast. After setting 7 pH grades under the same condition, we are able to obtain results by checking the remaining glucose, which can indicate the respiratory intensity. We also did some other experiments exploring how time and quantity of yeast affect yeast’s anaerobic respiration. Key Words: Yeast Anaerobic Respiration pH 引言 酵母无氧呼吸速率可以用多种指标来表示，如通过测定CO2浓度[1]、耗糖量[2]，也可以用酵母生殖，即酵母细胞的轻重或多少来表示，还可以用酒精浓度[3]来表示。但由于CO2浓度、细胞轻重都只能定性测定，而酒精浓度在呼吸速率较低的情况下很低[4]，不易测定准确，所以本实验还是以测定耗糖量做为酵母无氧呼吸量的指标，因为其相对于别的方法最为准确。 本实验采用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法和Benedict试剂来平行测定酵母无氧呼吸之后剩余的葡萄糖含量。DNS法是利用DNS与还原性的葡萄糖共热后被还原成棕红色的氧基化合物。在一定浓度范围内，葡萄糖的量和棕红色物质颜色的深浅程度成一定比例关系，可以用分光光度计进行测定。本方法的优点是快速、杂质干扰较小。而Benedict试剂测定葡萄糖含量是利用葡萄糖还原氢氧化铜成氧化亚铜砖红色沉淀，此反应有特定的比例系数关系，可以通过对沉淀量的称量来表征葡萄糖量的多少。我们采用两种方法平行进行测定是为了减小系统误差，即方法误差。 目前，对于酵母无氧呼吸强度随pH变化的测定研究报道较少，而研究酵母无氧呼吸的适宜pH对食品加工及酿酒工业[5]中都会有非常重要的指导意义。 本实验中发酵条件如温度[6]、pH梯度[7]等的选择都很重要。条件的变化会对实验结果有较大的影响[6]。预计的实验结果是pH对酵母无氧呼吸的影响与pH对酶的活性相似，即整个耗糖量呈抛物线形，中间高两边低。但结果是两个平行的方法测出的结果都跟我们的预期结果不一样，于是我们又做了后续的一系列探究实验，探究pH随时间的变化、缓冲液浓度和发酵时间长短对结果的影响，以探寻造成实验现象异常的原因。 1实验部分 1.1实验流程 实验流程 1.2仪器与试剂 1.2.1仪器 精密电子天平、电热恒温水浴锅、离心机、752型紫外可见分光光度计 玻璃棒、烧杯、容量瓶、移液枪、试管、滴管、离心管 广范pH试纸、精密pH试纸、温度计、煤气灯 1.2.2试剂 市售干酵母（番禹梅山-马利酵母有限公司） 磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O） 固体、磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）固体、硫酸铜（CuSO4·5H2O）固体、氢氧化钠（NaOH）固体、柠檬酸钠固体、无水碳酸钠（Na2CO3）固体、葡萄糖固体 液体石蜡、DNS试剂、蒸馏水 1.3实验步骤 1.3.1 试剂的制备 1.3.1.1无氧水的制备 取500ml大烧杯两个接取纯净水烧开，用保鲜膜套住杯口，放置冷却。 1.3.1.2缓冲溶液的配制 1.3.1.2.1母液的配制 0.2mol/L磷酸