[理化生]探究“酵母菌种群大小的动态变化”.ppt

三．探究步骤 1.酵母菌培养液的配制 （1） 5%的葡萄糖500ml。 （2） 分装、包扎 　（３）高压蒸汽灭菌：121摄氏度、２0分钟 ２、接种培养 用天平称取０.１克活性干酵母投入盛有５０0ml葡萄糖培养基的锥形瓶中，置于28oC恒温培养箱中培养． ３　取样观察和计数 定时取样，将培养液滴在血球计数板上，选取视野进行观察和计数，计算1ml培养液中酵母菌的个体数． 4.绘制种群个体数量变化的动态曲线 以时间为横坐标，１ml培养液中酵母菌的数量为纵坐标，绘出培养液中酵母菌种群个体数量变化的动态曲线． 血球计数板的构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上由4条槽构成3个平台。 中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每半边的平台上各刻有一个方格网。 方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm。 计算公式 1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖 玻片。 2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 3.用10×镜观察并将计数室移至视野中央。 4.在40×镜下计数：计数4个（或5个）中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。 5.注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计一半。 注意事项 (1)显微镜计数时，对于压在小方格界线上的酵母菌，应只计数相邻两边及其顶角的酵母菌。 (2)吸出培养液进行计数前，需将试管轻轻振荡几次，目的是使培养液中的酵母菌均匀分布，减少误差。 [解析]:培养液中物质的浓度过大，会造成细胞渗透失水而抑制酵母菌的生长繁殖，因此，①、②是A或B，③、④为C或D。培养液体积越小，则瓶内氧气越多，酵母菌进行有氧呼吸，生长繁殖快，达到最大数量的时间短，故①是B，②是A，③是D，④是C。B组和A组的浓度一样，只有体积不同，故实验结果的差异是由体积造成的，培养液较多，与空气接触面积较小，故供氧较少；D组和B组的体积相同而浓度不同，实验结果不同只能是由浓度不同造成的，葡萄糖浓度较低，故营养物质供应较少；因为酵母菌在培养液中分布并不均匀，故需摇匀培养液后再取样，由于后期酵母菌的数量多，可能造成堆积而无法计数，应进行稀释后再取样计数；由于用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板可能会使血细胞黏固在血球计数板的小室内，造成下次无法使用，正确的方法是浸泡和冲洗。 * * 一．探究目的 1.初步学会酵母菌等微生物的显微镜计数原 　　理和方法。 2.观察种群数量的变化，学习种群数量变化 　　的动态曲线的绘制。 探究“酵母菌种群大小的动态变化” 二．探究原理: 　　用液体培养基培养酵母菌，种群的增长受培养液的成分、空间、pH、温度等因素的影响。 　　　可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐标轴做曲线，从而掌握酵母菌种群数量的变化情况。 血球计数板直接计数法 一、血球计数板计数的原理： 　　利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物技术方法。这种方法的优点是直观、快速。 　　　此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法． 　 　 血 球 计 数 板 的 构 造 计数室通常有两种规格。 一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。 但是不管计数室是哪一种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成 每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2． 盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm3． 使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。 计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。 如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 25×16计数板： 总菌数/ml=每小方格内菌数×4×106×稀释倍数 　（酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×10四次方×稀释倍数 ） 二　 操作步骤 1、菌悬液的制备 为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5-10个酵母为宜，可采用10倍系列稀释法。 2、镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。如有污物，