[理学]2第四章 种子的扩大培养.ppt

三、种子质量的控制措施 种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。因此首先必须保证生产菌种的稳定性，其次是提供种子培养的适宜环境保证无杂菌侵入，以获得优良种子。 菌种稳定性的检查： 稀释→划线→摇瓶培养→检测出生产率高的菌种备用。适用于所有保藏菌种，且一年须 一次 无杂菌检查： 显微镜观察或平板划线观察 四、种子质量标准 1、细胞或菌体 菌丝形态、菌丝浓度和培养液外观（色素、颗粒等） 单细胞：菌体健壮、菌形一致、均匀整齐，有的还要求有一定的排列或形态； 霉菌、放线菌：菌丝粗壮、对某些染料着色力强、生长旺盛、菌丝分枝情况和内含物情况好。 2、生化指标 种子液的糖、氮、磷的含量和pH变化。 3、产物生成量 在抗生素发酵中，产物生成量是考察种子质量的重要指标，因为种子液中产物生成量的多少间接反映种子的生产能力和成熟程度。 4、酶活力 种子液中某种酶的活力，与目的产物的产量有一定的关联。 五、种子异常分析 菌种生长速度，过快或过慢 菌丝结团 菌丝粘壁 第三节 实例 一、谷氨酸发酵的菌种扩大培养 斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵罐 1、斜面菌种的培养 菌种的斜面培养必须有利于菌种生长而不产酸，并要求斜面菌种绝对纯，不得混有任何杂菌和噬菌体，培养条件应有利于菌种繁殖，培养基以多含有机氮而不含或少含糖为原则。 (1) 斜面培养基组成 葡萄糖 0.1％ 蛋白陈 1.0％ 牛肉膏 1.0％ 氯化钠 0.5％ 琼脂 2.0~2.5％ PH 7.0~7.2 （传代和保藏斜面不加葡萄糖） (2) 培养条件：33~34℃，培养18~24h 2、一级种子培养 一级种子培养的目的在于大量繁殖活力强的菌体，培养基组成应以少含糖分，多含有机氮为主，培养条件从有利于长菌考虑。 (1) 培养基组成 葡萄糖 0.25％ 尿素 0.5％ 硫酸镁 0.04％ 磷酸氢二钾 0.1％ 玉米浆 2.5~3.5％(按质增减) 硫酸亚铁、硫酸锰 各2ppm PH 7．0 (2) 培养条件 用1000mL三角瓶装入培养基200mI，灭菌后置于摇床上振荡培养12h，培养温度33~34℃ (3) 一级种子质量要求 种龄：12h pH值：6.4± 0.1 光密度：净增OD值0.5以上 残糖：0.5％以下 无菌检查：(-) 噬菌体检查： (-) 镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐 革兰氏阳性反应。 3、 二级种子培养 为了获得发酵所需要的足够数量的菌体，在一级种子培养的基础上进而扩大到种子罐的二级种子培养。种子罐容积大小取决于发酵罐大小和种量比例。 培养基组成 (2)培养条件 接种量：0.8~1.0％ 培养温度：32~34℃ 培养时间：7~8h 通风量 50L种子罐1:0.5 搅拌转速340r／min； 250L种子罐1:0.3 搅拌转速300r／ min 500L种子罐1:0.25 搅拌转速230r／ min (3)二级种子的质量要求 种龄 7~8h pH 7.2左右 OD值 净增0.5左右 无菌检查 (-) 噬菌体检查(-) 二、青霉素生产的种子制备 制备过程 安培管 → 斜面孢子 → 大米孢子 → 一级种子 → 二级种子 → 发酵 1、斜面孢子 培养基：甘油、 葡萄糖、 蛋白胨等 培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细 培养条件：25℃、7天, 注意湿度50%左右 2、大米孢子 培养基：大米及氮源（玉米浆） 培养基的特点：成本低，米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于孢子的生长。 培养条件：25℃、7天，控制湿度 大米孢子的要求：1粒米含1.4*106个孢子 3、一级种子 培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆 目的：长菌体 培养条件：27℃，40小时 接种量：200亿孢子/吨 4、二级种子 培养基：同上 培养条件：27℃、10-14小时 接种量：10% 种子的质量要求 菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，处于Ⅲ—Ⅳ期 青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期，1-4为年青期，4-6期合成青霉素的能力最强 第三节 生产发酵罐的无菌接种 生产规模发酵罐的接种，包括两个方面： 从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器中移种 从一个种子罐移入另一个生产发酵罐中 从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种 从种子罐接种 第四章 种子的扩大培养 定 义 种子扩大培养：是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。