[医学]9实验动物技术.ppt

第十二章 转基因动物培育技术 一. 概况 二. 转基因动物的原理和方法 三. 转基因动物的应用 第一节 实验动物胚胎工程的基本内容 一、超数排卵(Superovulation) 1．几种常用于超数排卵的激素 2．超数排卵(Superovulation)在实验动物中的应用 二、胚胎培养(EmbryoCUlture) 三、胚胎保存(Embryo preservation) 四、胚胎移植(Embryo transfer) 五、胚胎分割(Embryo split) 六、体外受精(In Vitro fertilization) 七、显微受精(Microfenilization)又称辅助受精 (Assisted fertilization) 八、细胞核移植(Nuclear transplantation) 九、卵的激活与孤雌发育(Ocyte activation and parthenogenetic development) 十、胚胎干细胞(Embryonic stem cell)简称ES细胞 第二节 实验动物冷冻胚胎库的建立 一、器材和试剂 1．器材 (1)液氮罐 (2)生物冷冻仪 (3)解剖显微 镜、冰箱、CO2培养箱、渗透压测定仪 (4)手术 器械、注射器、针头、玻璃表面皿、玻璃细管、 胚胎管(0．25m1)或安瓿等 (5)针头过滤器， 0．22um和0．45um孔径的滤膜 2．试剂药品 3．溶液配制 4．操作程序 (1)超数排卵 (2)采集胚胎 (3)挑选胚胎 (4)胚胎冻存 (5)资料 (6)入库的各品种品系胚胎，必须分2份以上，放存在不同罐内和不同地方 (7)当需要使用胚胎和检测胚胎时，取出机动胚胎管，按冻存方法条件，采用相应的解冻方法解冻、复苏 (8)每个品种品系冻存胚胎数量 第三节 试管动物的培育 一、试管小鼠的培育 (一)器材和试剂药品 1．器材设备 2．试剂药品 (二)溶液配制 (三)方法步骤 1．小鼠精子采集与获能 2．小鼠卵子获取 3．体外受精 4．受精卵培养 5．胚胎移植 二、试管兔的培育 (一)几种溶液的配制 1．培养液成份 2． PBS液 3．TCM—199液配制 4．DM(Defined Medium) (二)精液采集和获能 1．采集精液 2．精子获能 (三)供体母兔超排 (四)受体母兔同步发情 (五)供体母兔注射HCG (六)体外受精 (七)受精卵培养 (八)胚胎移植 三、试管猕猴的培育 (一)溶液配制 (二)超排 (三)采卵 (四)采精与精子获能 1．电刺激采精器 2．用直肠探子法的采精技术 第十二章 转基因动物培育技术 一. 概况 二. 转基因动物的原理和方法 三. 转基因动物的应用 一. 概况 核转移技术 即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，使之发育成个体，即克隆(clone)。 转基因动物（transgenic animals）是指染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一类动物。 整合到动物染色体基因组的外源基因被称为转基因(transgene) 。 转基因技术则是指制备转基因动物所需的一套技术，它涉及外源基因的组建、载体、受体、基因导入技术、供转基因胚胎发育的体外培养系统和宿主动物等许多方面。 2.研究现状 ????? 转基因动物自1980--1981年产生后，迅速发展。现已广泛应用于医药、农业及生物学领域。在医学领域己用于遗传病、肿瘤、心血管疾病、免疫性疾病的研究，包括建立疾病的病理模型，探讨其病因、发病机理和基因治疗方法，研究基因表达调控以及进行药物干预和新药的开发实验等。建立疾病的转基因动物模型是转基因动物技术应用于医学方面的一个重要研究内容。 在农业方面，转基因农业动物研究有了很大进展，尤其在通过胚胎细胞或体细胞将基因导人牛、猪、羊和山羊，产生可遗传的转基因牲畜方面发展很快。说明转基因牲畜不仅可作为生物反应器，为人类生产基因工程产品和用于牲畜品种改良，提供更好的服务，同时也促进了胚胎学和发育遗传学的飞速发展，并开拓了医学研究的新领 二、转基因动物培育的原