[医药卫生]色谱条件的选择.ppt

色谱条件的选择－讲稿 山东大学 王吉顺 2005.8 色谱条件包括以下内容： 1.仪 器：生产商，型号 2.色谱柱：柱商品名称，填料商品名称，填料类型， 色谱 柱长度（cm）和内径（mm），填料粒经（um） 3.流动相：流动相组成和比例，流速（ml/min） 4.检测器：型号及参数（如波长nm） 5.进样量：体积（ul） 6.柱 温：（℃） 其中我们更为关心的是：色谱柱和流动相（本章节主要讨论的问题） 色谱柱的选择 大多数化合物是可以使用C18柱分离 ? C18优点：柱便宜，流动相便宜，使用时间长，易于通过改变流动相得到最佳分离， 药品本身具有纯度高的特点，容易分离，辅料和分解产物是分离的难点。 比中药成分的分离，体液中药物成分的分离，微量成分的分离，杂质成分的分离，食品中药物残留的分离简单的多。 选择色谱条件的方法 1．查文献，学习别人的方法 2．文献中没有的新药和新化合物可以使用结构类似化合物的色谱条件 3．自己积累药物分析的色谱条件，从中寻找规律，尤其是要总结解决问题的方法。把自己积累的方法用于以后的色谱分析中。 不建议在自己对被分离物质的性质不了解的情况下，自己摸索色谱条件 色谱柱的分类 1．? 根据担体材料分类 （1）硅胶型：SiO2；C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2；苯基 （2）聚合物型： 聚苯乙烯类（离子交换；凝胶色谱柱）； 聚丙烯酸酯（离子交换）； 聚乙烯醇：C18；离子交换 （3）钛柱：比硅胶型的稳定性提高 （4）其它类型 色谱柱的分类 2. 根据分离方式分类 (1)正相：SiO2； CN；NH2；苯基 (2)反相：C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2 ；苯基 (3)离子交换：弱碱阴离子交换；弱酸阳离子交换 强碱阴离子交换；强酸阳离子交换 (4)凝胶过滤：水溶性凝胶过滤；油溶性凝胶过滤 (5)其它类型：手性柱等 色谱柱的分类 3.根据色谱柱尺寸分类 （1）10cm～50cm内径为制备柱 （2）4cm～8cm内径为标准柱 （3）3cm一下内径为小孔柱或微孔柱和毛细管柱 （4）柱长一般为15cm、25cm、30cm；50cm一般用于制备柱或特殊柱型，5cm一下为快速柱(包括预柱和保护柱) 色谱柱选择方法 1.氨基酸 (1)结构特殊，一般使用离子交换柱分离，阳离子交换柱是使用最广泛,是最成熟的方法。分离氨基酸的阳离子柱分为锂型柱和钠型柱，锂型柱可以分离谷氨酰胺和谷氨酸。 (2)反相柱也可以分离氨基酸，但不能分离所有氨基酸。柱前衍生化法分离水解氨基酸也非常有效，且方法简便，所用的仪器简单。 氨基酸分析 色谱柱选择方法 肽和蛋白质 凝胶过滤：根据分子量的大小差别进行分离 离子交换：根据分子所带的电荷的差别进行分离 反相和疏水色谱：根据分子的疏水性质的差别进行分离 亲和色谱：根据复合的相互作用的差别进行分离 蛋白质 蛋白质 色谱柱选择方法 核酸 核酸在生命科学领域中占有重要位置，在今后的新药研发领域中同样占有重要位置。核酸可以分为一下三类： 腺嘌呤（核酸碱基） 腺苷（核苷；核酸碱基＋糖） 腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸） ? 腺嘌呤（核酸碱基）和腺苷（核苷；核酸碱基＋糖）用阳离子交换柱或反相柱进行分离； 腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸）用阴离子交换柱分离，选择合适的流动相也可以用反相柱进行洗脱； 核酸 核酸 核酸 色谱柱选择方法 糖的分离 ★糖的种类很多，可分为单糖（木糖，阿拉伯糖；葡萄糖，果糖，半乳糖）、二糖（蔗糖，麦芽糖）、低聚糖和多糖。 ★单糖和二糖可以使用氨基柱分离（分离异构体效果不很好），还可以使用阴离子交换柱分离，缺点是分离时间较长。 ★低聚糖也可以使用氨基柱分离（分离异构体效果不很好），还可以使用水溶性凝胶过滤色谱柱进行分离（色谱柱价格较贵，色谱柱不易保存）。 ★多糖使用水溶性凝胶过滤色谱柱进行分离。 ★另外还用部分公