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[医学]流式细胞术
致:
第四军医大学
口腔医学院
流式原理与科研应用
BD公司生物科学部
李雪
2009年4月8日
市场情况
1973年世界第一台商品化的流式细胞仪FACS I 由BD公司
和美国斯坦福大学共同研制成功
1980年北京师范大学引进了中国的第一台流式细胞仪
FACS II
BD是全球最大的流式细胞仪生产商和供应商,在全球的
占有率为75%,在中国75%
在全国各大医院和科研院所,大部分为BD公司的仪器,
总计数量已超过1000台, 如:军科院,301等部队医院,
四医大校部及附属临床医院等等
BD Biosciences
Immune Function
流式基本概念
流式细胞术的基本概念
• 流式细胞术 (Flow Cytometry, 简称FCM)是一种可以快
速、准确、客观,并且能够同时检测快速直线流动状态中
的单个细胞的多项物理及生物学特性,加以分析定量的技
术,同时可以对特定群体加以分选。
• 流式细胞仪 (Flow Cytometer )集激光技术、电子物理技
术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技
术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。
BD Biosciences
Immune Function
流式检测的样本
• 可检测的样本种类多样:
各种细胞(如外周血,骨髓,细针穿刺物,体腔灌洗
液,实体组织,悬浮或贴壁培养的细胞),微生物,人
工合成微球等
New!
血清、血浆、唾液、培养上清、细胞裂解液
• 样本制备:
• 单细胞悬液(天然,机械研磨/消化)
5 7
• 5×10 ~1×10 cells/ml,约0.5~1ml,300目筛网过滤
BD Biosciences
Immune Function
流式细胞仪的检测范围
细胞结构 细胞功能
• 细胞大小 • 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原
• 细胞颗粒度 • 细胞活性
• 细胞表面积 • 细胞内/外的细胞因子
• 核浆比例 • 激素结合位点、细胞受体
• DNA含量与细胞周期 • 蛋白磷酸化
• RNA含量 • pH值
• 蛋白质含量 • 钙离子浓度
• …… • 膜电位
……
BD Biosciences
Immune Function
流式细胞仪的原理
散射光信号
• 当细胞颗粒通过聚集的激光束时,激光向各个方向散射。与激光束
BD Biosciences
方向同轴的称前向角散射光信号(FSC )。与激光束垂直的称为
Immune Function
侧向角散射光信号(SSC)。
散射光信号
Right Angle Light
Detector
αCell Complexity
SSC
Incident
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