[医药卫生]检化员微生物培训.ppt

洁净室沉降菌测试方法 1.测试时间 1.1对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。 1.2对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。 2.采样方法 将已制备好的培养皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 2.2.培养 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。 洁净室沉降菌测试方法 3.菌落计数 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。 4.注意事项 4.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 4.2采取一切措施防止人为对样本的污染。 4.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 4.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 4.5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 洁净室沉降菌测试方法 5.测试规则 5.1.测试状态 5.1.1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。 5.1.2沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 5.1.3测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。 5.2.测试人员 5.2.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 5.2.2静态测试时，室内测试人员不得多于二人。 最少采样点数目 同时满足最少平皿数 采样点的布置 采样点的位置可以同悬浮粒子测试点。 a）工作区采样点的位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。 b）可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。 采样点位置的详细规则见附录B（标准的附录）。 采样点布置 微生物实验前准备 微生物实验控制1：环境控制 微生物实验控制2：人员管理 微生物实验控制3：灭菌 微生物实验控制4：培养基质量控制 微生物实验控制5：无菌操作 琼脂平板接种法（分离培养法） 单个菌落 单个菌落 培养基质量控制：灵敏度检查 中国药典2010年版 明确规定： 培养基灵敏度、微生物限度检查法检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 培养基质量控制：灵敏度检查 中国药典2010年版在新增的“药品微生物实验室规范指导原则”中对菌种有了较为明确的规定： 允许使用标准菌株和商业派生菌株 标准菌株应按保藏机构提供的说明进行复活 标准储备菌株应进行纯度和特性确认 标准储备菌株建议采用低温冷冻干燥、液氮贮存或超低温冷冻保藏的方法 标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株 冷冻菌株解冻后不得重新冷冻和再次使用 工作菌株不可替代标准菌株，商业派生菌株仅可用作工作菌株 菌株传代基本概念 标准菌株：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。（0代） 标准储备菌株：由标准菌株经一次传代得到的培养物。（1代） 商业派生菌株：由供应商提供的所有特性与标准菌株等效的菌株。（2代） 工作菌株：由标准储备菌株经传代得到的培养物。（2代） 代：将活的微生物接种到新鲜培养基中进行培养，并希望获取新的微生物培养物。这种操作方式，新培养物对接种培养物而言就称为一代。 各类菌种保藏条件及时间 菌 种 保 管 ? 菌种保管应有专人负责，保存与加锁的冰箱中或特制的白铁箱中加锁置阴暗处，确保菌种安全。因工作变动时，必须做好交接工作。 ? 菌种应有详细登记本，包括名称、分离日期、鉴定日期、鉴定者、主要鉴定性能，并注意记录使用、转移及销毁情况和原因。 ? 各种菌种应按规定时间定期移种。一般每移种3次后作一次全面鉴定。注意菌种有无污染和变异，如发现污染和变异时，应及时更换。 ? 购置菌种，应有介绍信。全部保存菌种应具备清单，并定期向部门负责人报告。 混浊生长：液体变混浊 肉汤培养基有菌生长的常见形式 革兰氏染色步骤 涂片：用纱布擦净玻璃片，以无菌接种环取一小滴无菌生理盐水，然后用无菌接种环挑取少数菌苔（落）或液体培养基培养物（不必加盐水），在玻璃片中央涂成一薄膜。 干燥：涂片后放室温中自然干燥。 固定：将玻片