[工程科技]第二章_组织培养技术2.ppt

第二章 药用植物组织培养技术 第一节 植物组织培养的理论基础 第二节 组织培养实验室基本配置 第三节 组织培养基本操作 第四节 愈伤组织的诱导与继代 第五节 药用植物的离体快繁和脱毒苗生产 第六节 花药和花粉培养 第七节 药用植物的组织培养实例 第一节 植物组织培养的理论基础 细胞全能性 脱分化与愈伤组织的概念 离体条件下植株再生途径 植物组织培养的类型 脱分化 外植体→愈伤组织或 ↗体细胞胚↘完整植株 脱分化细胞 ↘不定器官↗直接生长茎尖培养（较大时）――→完整植株 发育幼胚培养（较大时）――→完整植株 一 实验室设置二 仪器设备 一 实验室设置 实验室是细胞工程研究的主要场所，应能以下方面的工作。 洗涤间 培养基配制间 准备室 消毒间 无菌操作室 无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。 通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。 无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋，室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。 培养室 室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。 培养室应配有培养架、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在20cm，光照强度为2000-3000lx。 辅助实验室 鉴定室 细胞学鉴定室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。应配置各种显微镜、照相系统等。 生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。 离心机、酶联免疫检测仪、天平、PCR仪等。 温室为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。 实验室基本仪器设备 第三节 组织培养基本操作 一、灭菌技术二、无菌操作技术 三、培养基的配置四、外植体的选择及处理 五. 组织培养常见问题及对策 一、灭菌技术 灭菌：是组织培养中重要的工作环节之一，指采用理化手段杀死物体表面及其孔隙内的一切微生物。 培养基是植物组织培养中的主要部分。 除了培养材料本身因素外，培养基的种类和成分等直接影响培养材料的生长和发育，应根据培养材料的种类和培养部位选择适宜的培养基。 三.培养基的成分及其配制 （一）培养基的种类 根据其作用不同，培养基分为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基。 根据培养物的培养过程，培养基分为初代培养基和继代培养基。 初代培养基是指用来第一次接种外植体的培养基。继代培养基是指用来接种继初代培养物的培养基。 4、根据其营养水平不同，培养基可分为基本培养基和完全培养基。 基本培养基（就是通常称呼的培养基）主要有MS、White、 N6、B5 、改良MS、Heller、Nitsh、SH、 Miller等。 完全培养基就是基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如生长调节物质和其他复杂有机物质等。 MS+6-BA0.5+KT0.5+NAA0.5+Su3%+Ag0.7% 培养基的选择：1.无机营养成分：一般在现有培养基配方中选择。例如：MS是广谱性培养基，N6用于单子叶植物的培养。豆科多用B5培养基。2、植物生长调节剂：必须进行筛选试验。总体原则-当诱导愈伤组织形成时，细胞分裂素和生长素相对平衡；诱导芽分化时，细胞分裂素水平应高于生长素，诱导根则要低。3、有机成分要根据培养类型考虑。如进行器官和组织培养，一般不加复杂有机成分，而进行细胞和原生质体培养则要加。 如何控制植物细胞分化 分裂素/生长素的比例是控制芽和根形成的一个重要条件 比例高时——产生芽,比例低时——产生根 四、外植体的选择与处理技术一是生长在自然环境下的植物；二是在温室控制环境条件下生长的植物；三是无菌环境下已经过离体培养的植物。 外植体的选择 ①大小要适宜,不宜太小。外植体的组织块要达到2万个细胞（5-10mg）以上才容易成活； ②同一植物不同部位的外植体，其细胞的分化能力、分化条件及分化类型有相当大的差别； ③植物胚与幼龄组织器官比老化组织、器官更容易去分化，产生大量的愈伤组织； ④不同物种相同部位的外植