[物理]第7章 高效液相色谱.ppt

一、色谱定量公式： ▲选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法称为内标法。内标法的关键是选择合适的内标物。 ▲校正因子（f ） 其含义为：内标物峰面积与其浓度之比（As/Cs）是对照品峰面积与其浓度之比（AR/CR）的多少倍。 气相色谱法 GAS Chromatography 气相色谱分析 　 气相色谱法是利用气体作为流动相的一种色谱法。在此法中，载气 ( 是不与被测物作用，用来载送试样的惰性气体，如氢、氮等 ) 载着欲分离的试样通过色谱柱中的固定相，使试样中各组分分离，然后分别检测。 气相色谱仪组成 Ⅰ 载气系统：气源、气体净化器、供气控 制阀门和仪表。 Ⅱ 进样系统：进样器、汽化室。 Ⅲ 分离系统：色谱柱、控温柱箱。 Ⅳ 检测系统：检测器、检测室。 Ⅴ 记录系统：放大器、记录仪、色谱工作站。 (二 )分离条件选择和常见问题 2）分离度（R） R值越大分离效果越好 在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，按下式计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度。除另有规定外，应大于1.5。 二 色谱分离条件选择 1.色谱柱的选择 色谱柱=载体+固定液 固定液的选择原则为： “相似相溶原理” 柱长,柱内径的要求 2.载气流速的选择（与分析时间、柱效有关） 6. 检测器 温度:为了使色谱柱的流出物不在检测器冷凝而污染检测器．检测器温度一般需高于枚温30—50霓，或等于气化室温度 类型: 通用检测器有： 1、热导池检测器，TCD (Thermal conductivity detector) 测一般化合物和永久性气体 2、氢火焰离子化检测器,FID (Hydrogen flame ionization detector) 测一般有机化合物 专用检测器有： 3、电子俘获检测器，ECD (Electron capture detector) 测带强电负性原子的有机化合物 4、火焰光度检测器，FPD (Flame photometric detector) 测含硫、含磷的有机化合物 特殊检测器有：FTIR、MS、测化合物结构 一、色谱分离效能指标 分离度（resolution） 色谱分离的两种情况 t t S S 如何评价？ 色谱柱有两种：一种是内装固定相的，称为填充柱，通常为用金属（铜或不锈钢）或玻璃制成的内径2-6mm /长 0.5~10m 的 U形或螺旋形的管子 另一种是将固定液均匀的涂敷在毛细管的内壁上，形成中空的柱子，称为毛细管柱。 实际工作中，为了缩短分析时间，常使流速稍高与最佳流速。 3. 柱温的选择 柱温是一个重要的操作参数，直接影响分离效能和分析速度。 *固定液有一定的使用温度（tmax）。 *温度过高--组分挥发能力靠近--不利于分离 温度过低--扩散慢--平衡慢-峰宽-柱效下降-分析时间延长。 具体操作根据不同条件而定;对于沸点范围较宽的多组份试样，宜采用程序升温。 四. 进样时间和进样量 进样速度必须快,一般用注射器或进样阀进样时,进样时间都在一秒以内。 进样量适宜，一般比较小。过大分离不好，过小检测器灵敏度达不到。最大允许的进样量,应控制在峰面积或峰高与进样量呈线性关系的范围内。 五. 气化温度 进样后要有足够的气化温度。 在保证试样不分解的情况下，适当提高气化温度对分离和定量有利。汽化温度高于柱温30-70度。 溶剂中的离子与反离子进行交换， 是与带电荷相同的进行交换还是带电荷相反的进行交换？ 离子交换层析的基本步骤 固定相： 化学惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝胶、亲水凝胶、无机多孔材料。 流动相： 作用不是为了控制分离，而是为了溶解样品或减小流动相粘度。 四、凝胶色谱法（SEC） 常用流动相 ——四氢呋喃、甲苯、氯仿、二甲基酸胺和水 原理：利用被测组分分子大小不同、在固定相上选择性渗透实现分离。 凝胶过滤色谱： 以水或缓冲液作流动相 主要适合于水溶性高分子的分离 凝胶渗透色谱： 以有机溶剂作流动相 主要适合于脂溶性高分子的分离 用途 特点： 固定相与分子间作用力趋于零，柱寿命长 相对分子质量差别必须大于10％才能分离 第五节 HPLC的建立与应用 一、建立HPLC分析方法的一般步骤 1、根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种HPLC分离方式。 材料来源、浓度范围 组分特性、结构、分子量、溶解性等  一、建立HPLC分析方法的一般步骤 一、建立HPLC分析方法的一般步骤 2