附录ⅤD高效液相色谱法.PDF

带格式带格式的:的: 字体: 四号 带带格式格式的的:: 附录Ⅴ D 高效液相色谱法 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱 柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各 组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色 谱信号。 1.对仪器的一般要求 所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符 合有关规定。 （1）色谱柱 最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用 非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类 型的硅烷键合硅胶 （如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等）也有使用。正相色谱系 统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换色谱系统使用离子交换填 充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分 离通常使用手性填充剂。 填充剂的性能 （如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖 度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分 离效果。孔径在 15nm （1nm=10Å）以下的填料适合于分析分子量小于2000 的化 合物，分子量大于2000 的化合物则应选择孔径在 30nm 以上的填料。 带格式带格式的:的: 字体: 非加粗, 带带格式格式的的:: 除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在 3µm~10µm 之间。粒径更小 （约 无下划线 带格式带格式的:的: 缩进: 首行缩 带带格式格式的的:: 2µm ）的填充剂常用于填装微径柱（内径约 2mm ），使用微径柱时，输液泵的性 进: 2 字符 能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条 件也需作适当的调整。当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条 件的测定结果为准。 批注批注 [F1]: 此处分段 以硅胶为载体的普通键合固定相的使用温度通常不超过 35℃，为改善分离 批注批注 效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不能超过 60℃。 批注批注 [F2]: 此处分段 流动相的pH 值应控制在 2～8 之间。当pH 值大于 8 时，可使载体硅胶溶解； 批注批注 当pH 值小于 2 时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用 pH 值大于 8 的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有 高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或 1 非硅胶填充剂等；当需使用pH 值小于 2 的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如 具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基 硅烷键合硅胶填充剂，或有机-无机杂化填充剂等。 （2 ）检测器 最常用的检测器为紫外检测器，包括二极管阵列检测器，其 他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检 测器和质谱检测器等。 紫外、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测溶液的浓 度有关，还与化合物的结构有关；蒸发光散射检测器和示差折