显微镜直接计数和平板菌落计数.ppt

一. 实验目的 1. 学习、掌握显微镜直接计数法和平板菌落计数法； 2. 了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。 　二、实验原理 　　　 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微镜直接计数法和平板菌落计数法。 （一）显微镜直接计数法 　　 计数区的刻度有两种：一种是计数区 　分为16个中方格（中方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。 　　（一）平板菌落计数法 　　平板菌落计数法根据微生物在固体培养基上所形成的菌落一般由一个细胞繁殖而成的原理进行。即一长成的菌落代表一个活的细胞。计数时先将待测样品作一系列稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，再吸取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养单个细胞繁殖形成菌落，统计菌落数目即可计数出样品的含菌数。 ※显微镜直接计数法 ﹡优点：简单、快速、重复性高。 不足： 不能区分死细胞和活细胞，应用范围较窄； 一些小的细胞在显微镜下很难看到； 样品中菌液浓度不能低于106个/mL； 不能用于菌丝体或呈链状而不分散的微生物测定。 ※平板菌落计数法 ﹡优点：灵敏度高、可以区分死活细胞、应用广。 用于食品、饮料等微生物检查及消毒灭菌效果检查。 ＊不足： 　测定结果误差较大、操作比较烦琐、需要的时间较长。 三、主要器材 1. 活材料：啤酒酵母（S6） 、 解脂假丝酵母（S5） 2. 染色液：复红染色液（或结晶紫，美兰） 3. 器材：显微镜、血球计数板、载玻片、盖玻片 、擦镜纸、吸水纸、计数器、滴管、无菌吸管、无菌培养皿、马铃薯葡萄糖培养基。 （二）平板菌落计数法 1. 编号　将平皿和试管分别标记浓度。　 2. 稀释样品 将酵母菌样品进行适当稀释。 3. 取样　用无菌吸管准确吸取10-4、 10-5、 10-6稀释菌液各1 ml，放0.2 ml 于无菌平皿。 　4. 倒平板　于上述平皿中尽快倒入融化并冷却到45℃左右的培养基15 ml ，旋转混匀。　　 5. 计数 培养48 h后取出培养皿，算出同一稀释度的三个平皿中平均菌落数，再按公式计算每毫升样品中活菌数。 　六．注意事项 　1．计数器必须洗干净，勿刷 ； 　2. 千万注意勿损坏计数器 。 3. 平板菌落计数时，测定样品移入培养皿后要尽快倒入冷至45℃左右的培养基15 ml ，并迅速旋转混匀。否则，菌体会吸附在皿底，不易分散形成单菌落。 * 实验八 微生物显微镜直接计数 和平板菌落计数 四、操作步骤 （一）显微镜直接计数法 1. 稀释样品 将酵母菌样品进行适当稀释。 2. 镜检计数室　加样前先镜检计数室。若有污物则需清洗后才能加样使用。 3. 加样　在计数室上加盖玻片，用无菌吸管由盖片边缘加一小滴稀释菌液，让其渗入计数室，静置5分钟。 　4. 将计数板置于载物台上，先用低倍镜找到计数室，再用高倍镜对稀释菌液计数。 平板菌落计数法示意图 五、实验报告 （一）实验结果 　1. 将直接计数结果记录于表中。 　2. 将平板菌落计数结果记录于表中。 （二）思考题 　　某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1-2种可行的检测方法。