6第六讲-第三章-实验动物学微生物控制.pptVIP

第七节 实验动物的遗传（质量）监测 一、遗传标记的概念及其发展 1、遗传标记（Genetic Marker）的概念 遗传标记是指在遗传分析上用作标记的基 因，也称为标记基因。 遗传标记是一些等位基因或遗传物质，能在 动物体上以各种形式表现出的各种变异。 遗传标记的概念经历了从宏观到微观、从外 部到内部、从蛋白质到DNA的发展过程。 2、遗传标记概念的发展 ①形态学标记 能用肉眼观察和识别的外部性状。例如，动物 的毛色、角形、耳型、体型、外貌等。此法简单 直观，但标记数目少、多态性低、易受环境影响。 ②细胞遗传标记 主要是指染色体核型、带型和数量的变异等。此 法能反映出染色体结构和数目的多态性，但由于这 些变异往往带来有害的表型效应，生物难以忍受。 ③免疫遗传标记 以动物的免疫学特征为标记，主要是红细胞抗原 多态性和白细胞抗原多态性。 红细胞抗原多态性——血型，以细胞表面的抗原而定 白细胞抗原多态性——主要组织兼容性复合体（MHC），以白细胞表面的抗原而定。 ④生化遗传标记（蛋白质多态性标记） 同一种动物中，具有相同功能的蛋白质存在两种以上的变异体，有些可以用电泳方法区分其中的差异 ⑤分子遗传标记 ○分子遗传标记是以DNA多态性为基础的遗传标记，又称DNA分子标记或多态性DNA标记。 ○自20世纪70年代以来，随着分子生物学的发展，相继建立了多种分子遗传标记检测技术，例如，RFLP、VNTR、RAPD、AFLP、SNP等 ○分子遗传标记的特点：遗传多态性高；检测方法简单快捷；遗传共显性，能分离出等位基因的三种基因型。 二、近交系的遗传监测 （一）形态学方法(形态学标记) （二）生化标记监测法 （生化遗传标记、蛋白质多态性标记） （三）免疫学方法（免疫遗传标记） （四）分子生物学技术（分子遗传标记） 第三章 微生物学质量控制的标准化 本章的主要内容： 第一节 无菌动物（GF或GFA） 第二节 悉生动物 （GN或GNA） 第三节 无特定病原体动物（SPF） 第四节 清洁级动物CL和普通级动物CV 实验动物微生物学质量控制的标准化是实验动物标准化的主要内容之一。 按微生物学控制标准，我国将实验动物分为四类，即： ①普通级动物（CV） ②清洁级动物（CL） ※③无特定病原体动物（SPF） ④无菌动物（GF）和悉生动物（GN）。 国家标准分级 国际分级法 各种动物国家标准分级 由于微生物净化程度的不同，其饲育环境也各不相同。 普通级动物通常饲育于开放系统； 清洁级动物饲养于半屏障系统； 无特定病原体动物饲养于屏障系统； 无菌动物及悉生动物饲养于隔离系统。不同等级实验动物的相互关系见图3～1 一、基本概念 无菌动物（germfree animal ，GFA） 是指在动物体内、外均不带有用现有检测技术手段能够检出的微生物和寄生虫的动物。 无菌动物在自然界是不存在的。 无菌动物是个相对的概念，绝对的无菌动物是不存在的。 必须饲养在无菌隔离器中（见图3-2）。 无菌监测的目的： 确保无菌状态 无菌监测的时间： 每年送检动物1-2次。 无菌监测的样品有： 粪便、尿液、垫料、涂 抹隔离器内壁用的棉拭 子等，进行细菌培养。 目前，国际上对无菌动物无菌监测的内容与方法尚无统一的标准。 被列入监测的细菌有：沙门氏杆菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、结核杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌等18种。 被列入监测的病毒有：鼠脑膜炎病毒、鼠肝炎病毒、鼠细小病毒和鼠脊髓灰质炎病毒等14种。 1、体形变小、寿命延长 无菌大小鼠一般生长发育比普通大小鼠慢，体形也要小些，而无菌动物的寿命却比普通动物要长很多。 2、盲肠肥大 无菌动物的盲肠比普通动物要大5～6倍，如无菌豚鼠的盲肠可达体重的1／3。无菌动物通常排稀便，排尿量少。 3、肠壁变薄、肝脏重量下降、心脏变小。 由于缺乏微生物的刺激，其淋巴结与脾脏发育不良，产生抗体的能力很弱； 过敏反应、对异体移植物的排斥反应以及自身免疫现象消失或减弱； 用低分子无抗原性饲料喂饲无菌动物时，血清中几乎不存在丙种球蛋白和特异性抗体。 5、抗辐射能力强 普通动物受辐射后往往因细菌感染引起并发症而造成动物死亡。 无菌动物就不存在这种情况，因而提高了抗辐射能力。 四、无菌动物的应用 1、微生物学与寄生虫学研究 研究宿主与微生物、寄生虫相互关系是无菌动物学研究重要内容之一。 中国预防医学科院微生物学研究所，用志贺氏痢疾杆菌攻击无菌豚鼠，几天后引起豚鼠死亡。但用其攻击已知菌豚鼠，则该豚鼠没有死亡，证明了微生物间有拮抗作用。 美国、波兰科学家用无菌动物研究发现了肠道菌群与寄生虫依存关系等。 2、免疫学研究 无菌动物的体内既无抗原也无特异性抗体。处于一种免疫“原