土壤中产淀粉酶菌株筛选.doc

学生实验报告 实验名称：土壤中产淀粉酶菌株的筛选及不同金属离子对淀粉酶活性测试 班组： 姓名： 日期： 年 月 日 得分： 教师： 应用现状与前景 淀粉酶是α－淀粉酶、β－淀粉酶及葡糖淀粉酶的总称，是现代科学中非常重要的一种酶。由于淀粉酶应用广泛， 因此，在酶家族中，它是非常重要的一种酶。令人感兴趣的是，从真菌中分离的淀粉酶也是第一个用于工业化生产的酶。淀粉酶在食品、发酵、纺织及造纸业中具有 广泛的应用。在淀粉加工厂中，微生物淀粉酶可以成功的取代化学水解，如果酶制备成适合的性状，它也可以应用于制药和精细化工业中。 淀粉酶是指一类能催化分解淀粉分子中糖苷键的酶的总称，主要包括α－淀粉酶和β-淀粉酶等，淀粉酶广泛存在于动植物和微生物中，淀粉酶对淀粉的分解作用是工业上利用淀粉的依据，也是生物体利用淀粉进行代谢的初级反应的依据。淀粉酶是最早用于工业生产并且抉仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。淀粉酶种类繁多，特点各异，可应用于造纸、印染、酿造、果汁和食品加工。医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂等多种。由于微生物数量多，繁殖快，工业生产主要采用微生物发酵法大量生产该制剂。关于淀粉酶活力的测定方法有多种，其中最常用的是以下三种：（1） 平板水解圈法，此方法是根据淀粉遇碘呈现蓝色，随着淀粉水解为糊精，蓝色逐渐消失面成为棕色反应物。（2） 硝基水杨酸法反应比色法淀粉酶活力大小可用其作用于淀粉生成的还原糖与3,5-二硝基水杨酸的显色反应来测定。（3） 碘反应比色法，根据淀粉酶作用后淀粉溶液与碘反应时蓝色物消失，通过比色测定光吸收值，就可衡量该酶活力的大小。土壤是微生物存在的最佳场所，土壤中的微生物种类和数量都是惊人的，从土壤筛选淀粉酶高产菌株是一个有效途径。本是从土壤中筛选淀粉酶细菌为目的。金属离子对酶的活性的影响比较复杂，有些金属离子可以提高某些酶的活性，而对另外一些酶的活性却有抑制作用。很多酶都需要金属离子来维持其活性Ca2+对提高淀粉酶的活性效果最好，这可能是由于Ca2+ 可提高细胞膜的通透性，有助于淀粉酶的分泌，同时它对多种酶的活性都有帮助，可能正是它的这种特性，使得不管是对微生物的生长还是对淀粉酶本身都具有重要意义。 NaCl, 琼脂粉 蒸馏水 KCl, CaCl2, MgSO4, ZnSO4, 卢卡式碘液 分离培养基采用牛肉膏蛋白胨固体培养基加0.2%可溶性淀粉，即牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、可溶性淀粉2g溶于1000mL蒸馏水中，再加入15g琼脂粉，pH调至7.2，121灭菌15min金属离子培养基共5种不同的金属离子，它们的基础溶液为：牛肉膏3g、蛋白胨10g、、蒸馏水1000mL；在此基础上，分别加入5gNaCl、KCl、CaCl2、MgSO4、ZnSO4，pH调至7.2，121灭菌15min。，待冷却至50左右时，于倒平板。用梯度稀释法来分离淀粉酶产生菌。取所采土样各g，加入到三角瓶中，加入无菌水mL，振荡0min制成土壤悬液，此时的稀释度为10-1。另取支试管，分别记作10-2、10-3、10-4、10-5、10-6共个梯度，每支试管内加入9mL无菌水。用无菌移液管从三角瓶中吸取1mL土壤悬液，加入到10-2试管中混匀，再从此试管中吸取1mL加入到10-2试管中，依此类推直至10-7试管。分别从10-4、10-5、10-6三个稀释度的试管中吸取L悬液，均匀涂布于分离培养基平板上，于30培养等长出菌落后，将检测试剂（碘液）加入到平板中，涂布均匀，菌落周围形成水解圈的菌株即是产淀粉酶的菌株。在初筛中分离到的产淀粉酶的菌株活化后30℃培养后，的直径并进行数据分析。 第一步：初染，结晶紫使菌体着上蓝紫色；第二步：媒染，碘和结晶紫形成大分子复合物，能被细胞壁阻留在细胞内；第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应——G+菌：细胞不能被酒精脱色，仍呈紫蓝色；G-菌：酒精将细胞脱色，细胞无色；第四步：番红复染。 进程安排 5月21日：移液管，培养皿等仪器干热消毒灭菌； 5月22日：培养基配制，无菌水制备，湿热灭菌； 5月23日：土样采集，倒平板，土壤稀释液制备，菌种培养； 5月23日至26日：菌种培养 5月26日：产淀粉酶菌株鉴别，并将产淀粉酶菌株接种至含金属离子的培养基; 5月26日至31日：菌株在含金属离子的培养基中培养； 5月31日：水解圈的测量，及菌株的革兰氏染色。 实验结果