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第4讲 生物技术在其他方面的应用 (4)实验操作步骤:制备MS培养基→外植体消毒→________→培养→________→栽培 比一比:MS培养基与微生物培养基有何主要不同? 答案:微生物培养基以有机营养为主,MS培养基则需提供大量无机营养,包括植物生长必需的大量元素和微量元素。 2.月季的花药培养 (1)理论基础:花粉具有________ (2)花粉发育过程: 、________、_________等阶段 (3)产生花粉植株的两种途径: 看一看:植物组织培养与花药培养技术有何相同与不同? 答案:相同点:培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。 不同点:花药培养的选材非常重要,需要先选择时期适宜的花蕾,花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基,花药培养对培养基配方的要求更为严格。 知识点二 蛋白质的提取和分离、PCR技术 1.血红蛋白的提取和分离 (1)凝胶色谱法:也称分配色谱法,是根据 分离蛋白质的方法。相对分子质量较小的移动速度较慢,而相对分子质量较大的无法 ,移动速度较快 (2)缓冲溶液:能够抵制外界的________对溶液pH的影响,维持pH_________ (3)电泳:带电粒子在________的作用下发生迁移的过程 (4)样品处理:红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析 :凝胶色谱柱的制作→ →样品的加入和洗脱→SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 思一思:用猪的血液与鸡的血液提取血红蛋白哪个效果更好? 答案:用猪的血液;因为猪的红细胞无细胞核和细胞器,结构简单,血红蛋白含量丰富,便于提取血红蛋白。 2.多聚酶链式反应扩增DNA片段 (1)PCR原理:在一定的缓冲溶液中提供 ,分别与两条模板链结合的两种引物, ,同时控制温度使DNA复制在__________反复进行 (2)PCR的反应过程:变性→________→延伸 菊花茎与月季花药组织培养的比较 1.引物是指能够与DNA母链的一段碱基序列互补配对的一小段单链DNA或RNA。 2.DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列,使这段固定长度的序列呈指数扩增。 3.影响萃取的因素 (1)主要因素:萃取剂的性质和使用量。 (2)次要因素:原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件。 4.萃取过程注意事项 (1)由于有机溶剂都是易燃物,直接使用明火加热容易引起燃烧、爆炸,因此萃取过程中应避免使用明火加热,采用水浴加热。 (2)为防止加热时有机溶剂挥发,还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。 二、影响植物组织培养的因素及成功的关键 1.影响因素 (1)内部因素:材料的选取。 (2)外部因素:营养成分的种类及配比;植物激素的用量及使用顺序;pH、温度、光照等。 2.获得成功的关键 (1)植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗逆性差,对培养条件要求较高。 (2)培养材料一旦被微生物污染,就会导致实验失败。原因是微生物增殖快,生长迅速,消耗养分多,并产生代谢废物毒害培养材料。 (3)无菌技术主要包括对操作空间、实验用具、实验材料以及操作者的消毒灭菌。 提醒 一旦发现培养物被污染,特别是真菌性污染,一定不要打开培养瓶。应先将被污染的培养瓶统一放在高压蒸汽灭菌锅内进行高压蒸汽灭菌,然后再打开培养瓶进行清理。 三、植物激素在组织培养过程中的重要作用 生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素,其作用及特点为: 1.在生长素存在的情况下,细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。 2.使用顺序不同,结果不同(具体如下表) ★★ 本部分内容与必修内容细胞分化有密切关系,是高考命题的热点,命题多考查植物组织培养基成分与作用、微型繁殖技术、脱毒苗培养、名贵中药材工厂化生产等具体实例,复习中应多加关注。 【典例1】 (2012·课标,39)为了探究6-BA和IAA对某菊花品种茎尖外植体再生丛芽的影响,某研究小组在MS培养基中加入6-BA和IAA,配制成四种培养基(见下表),灭菌后分别接种数量相同、生长状态一致、消毒后的茎尖外植体,在适宜条件下培养一段时间后,统计再生丛芽外植体的比率(m),以及再生丛芽外植体上的丛芽平均数(n),结果如下表。 回答下列问题。 (1)按照植物的需求量,培养基中无机盐的元素可分为__________和__________两类。上述培养基中,6-BA属于________类生长调节剂。 (2)在该实验中,自变量是________,因变量是________,自变量的取值范围是________。 (3)从实验结果可知,诱导丛芽总数最少的培养基是________号培养基。 (4
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