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激光扫描共聚焦显微镜LaserScanningConfocolMicroscopyLSCM
目的结构是用荧光探针标记的,
激光扫描共聚焦显微镜 形态学研究:组织细 都可以用激光共聚焦显微镜观察
胞标本的抗原免疫荧
(Laser Scanning Confocol 光检测,凋亡检测…
Microscopy, LSCM)
分子生物学:荧光原位杂交对DNA
活细胞动态荧光测量:细胞
和RNA定量,外源基因在真核细胞
内Ca2+、Cl 等离子的动态分
的表达及定位,蛋白质相互作用
科学实验中心三部 张四洋 布及定量,细胞连接间的信
(FRET)…
息传递(FRAP)…
成像基础:荧光
成像主要原理:pinhole (针孔)
照明针孔:光源后,点照明
检测针孔:检测器前,点探测
1
z sections = images
y
z
x
2
激光共聚焦显微镜的设计特点:
Laser :经过照明针孔后形成点光源,光源方向
性强、发散小、亮度高、颜色纯、单色性强
Beamsplitter (光束分离器) :将样品激发荧光与
其他非信号光线分开
Pinhole (照明针孔和探测针孔) :最大限度的阻
挡非聚焦平面以及聚焦平面上非焦点斑以外的
散射光,以保证探测器针孔所接受到的荧光信
号全部来自于样品焦点位置
PMT (PhotoMultiplier Tube, 光电倍增管) :检测
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