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[临床医学]HIV检测及临床意义
HIV检测及临床意义 中国医科大学附属一院 艾滋病确认实验室 尚 红 ——HIV的发现 Montagnie (LAS) 1983. Science 220: 868-871 Gallo (HTLV) 1983. Science 220: 865-86 Levy (ARV) 1984. Science 225: 840-842 1986 国际病毒分类委员会: HIV HIV-2 1986 西非 中国每年新发现的HIV/AIDS病例数(1985~2002) HIV感染可通过两种途径检测 直接检测病毒或其组成部分 检测人体HIV免疫反应——HIV特异性抗体 从感染到血清抗体阳转有一段窗口期,平均为1-3个月,有一小部分HIV感染者出现延迟反应 HIV感染后抗原和抗体的变化及其与疾病关系 HIV感染人体后出现一过性病毒血症,6-8周后血清抗体阳转,病毒滴度降低,在随后的5-8年无症状带毒期里HIV抗体一直存在,但病毒难查到。进入AIDS期后血浆中病毒再次出现。 故诊断HIV感染多数时间用抗体检测诊断,极早期(窗口期)用抗原检测。 HIV抗体诊断 目前临床上实际应用的是测定特异性HIV抗体,包括初筛和确认实验。 ELISA方法: 目前最常用的初筛实验,自1985年首次检测HIV-1抗体的试剂盒供市以来,已从第一代的全病毒抗原间接法发展到第四代的以重组的多肽抗原及抗P24抗体包被的双夹心法,使窗口期缩短了2-3周。 Closing the window 快速诊断试剂: 采用乳胶凝集、免疫斑点和免疫层析三种原理 快速、不需特殊仪器 敏感度、特异度低于ELISA,且价格贵 适用于血站覆盖不到的边远地区/城市大医院急诊手术前检查 快速诊断阳性结果还需经ELISA方法验证 蛋白印迹实验(WB) ——广泛使用的确认实验 用聚丙烯酰胺凝胶电泳将纯化的HIV蛋白抗原分开后转移到硝酸纤维膜上。标本中存在的HIV抗体与条带上的抗原结合,再加入酶偶联的抗人IgG抗体和底物,在抗原抗体结合的部位会出现有色条带 其可检测标本中针对HIV不同抗原的抗体,故被用做确认试剂。 不同的研究机构有不同的判定标准 P24抗原测定 (一)适用范围 (三)结果报告和解释 1、HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认。 2、HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染的辅助诊断依据,不能依此确诊。 3、HIV-1 P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应,不能排除HIV感染。 HIV核酸检测 1、辅助诊断 某些非典型的抗体反应,特别是不确定反应时,RNA的测定可提供非常有用的证据。 单纯使用RNA测定不能完全确定感染与否,但当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时(1000)提示感染发生的可能性非常大。 使用此指标应综合其他检测数据和样品背景情况进行综合分析与判断。 2、窗口期辅助诊断 在窗口期抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰,通常此高峰高于发病时的血浆病毒水平,早期病毒RNA测定具有特殊的意义。 目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个样品混合后的RNA检测以降低窗口期传播的残余危险度。 3、病程监控 由于HIV感染发生后病毒载量的变化具有一定规律,并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。 通常在感染后无症状期内发生的临床症状很难与AIDS发病时的症状区别,病毒载量测定可以帮助医生判断一个刚发生的症状是否与HIV感染有关。 4、指导治疗方案及疗效测定 并非在任何情况下感染者都应该进行抗病毒治疗,这不但是经济上的原因,更重要的是在于抗病毒药物的副作用和疗效。通常在病毒载量达到一定水平后(如35000-50000拷贝/毫升)才具有良好的效果。 只有通过治疗后病毒水平的检测才能确定治疗是否有效,通常治疗后病毒水平降低50%才被认为临床有效。 5、预测疾病进程 HIV疾病进程与病毒载量的关系十分密切,观察感染者病毒RNA水平可大致预测其发病的可能。如右图所示,病毒载量与6年发病率的关系为: 500时5.4%, 501-3000时16.6%,3001-10000时31.7%,10001-30000时55.2%,30000时则为80%。 定性检测 HIV核酸检测有定性和定量两类,定性检测用于HIV感染的辅助诊断。通常使用PCR或RT-PCR技术,使用分子生物学实验室通用的扩增试剂,引物可来自文献或自行设计,应尽量涵盖所有的或常见的毒株,也可使用复合引物。 定量检测 定量检测常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。目前
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