[临床医学]环境卫生学及管理监测.ppt

（三）生物监测法： 指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢（ACTT9372）， 菌片含量为5.0×105-5.0×106cfu/片，在160±2 ℃ 条件下，D值为1.3-1.9min，KT值≤19min,ST值为 ≥3.9min。 64 1、监测方法为：将枯草杆菌芽孢菌片分别装入超负荷运转 试管内（1片/管）。灭菌器与每层门把手对角线内，外 角处放置2个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，关好柜 六，经一个灭菌周期后，待温度降至80℃时，加盖试管 帽后取出试管。在无菌条件下，加入普通营养肉汤培养 基（5ml/管），36℃±1℃培养48h，观察初步结果，无 菌生长管继续培养至第7日。 2、监测周期：生物监测应每周监测一次。 65 （四）结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培 养阴性，若每个指示菌片接种的肉汤均澄清，判为灭 菌合格；若阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴 性，而指示菌片之一接种的肉汤管混浊，判为不合 格；对难以判定的肉汤管，取0.1ml接种于营养琼脂平 板，同灭菌L棒或接种环涂匀，置36℃±1℃培养48h， 观察菌落形态，并做涂片染色镜检，判断是否有指示 菌生长，若有指示菌生长，判为灭菌不合格；若无指 示菌生长，判为灭菌合格。 66 环氧乙烷灭菌 （一）物理监测法：每次灭菌应连续进行物理监测。 （二）化学监测法：每个灭菌物品包外应使用包外化学 指示物，作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌位置 放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，判定其 是否达到灭菌合格要求。 67 （三）生物监测法： 指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢（ACTT9372）， 1、监测方法：常规生物测试包放在灭菌器最难灭菌的部 位（整个装载灭菌包的中心部位）。灭菌周期完成后 应立即将生物指示物从被灭菌物品中取出，36℃±1℃ 培养7d（自含式生物指示物应遵循产品说明），观察 培养基颜色变化。同时设阳性对照和阴性对照。 2、监测周期：应每灭菌批次应进行生物监测， 68 （四）结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对 照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌 合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养 阴性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时 应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌 或是污染所致。 69 过氧化氢等离子灭菌的监测 一、物理监测法： 二、化学监测法： 三、生物监测： 指示菌株：嗜热脂肪杆菌芽孢（ACTT7953） 监测周期：应每天至少进行一次灭菌循环 的生物监测， 70 生物指示菌 生物监测周期 嗜热脂肪杆菌芽孢 压力蒸汽灭菌 每周一次 （ACTT7953） 枯草杆菌黑色变种芽孢 干热灭菌 每周一次 （ACTT9372） 枯草杆菌黑色变种芽孢 环氧乙烷 每灭菌批次 （ACTT9372） 过氧化氢等离子 嗜热脂肪杆菌芽孢 每天至少一次 （ACTT7953） 71 灭菌过程验证装置 PCD 对灭菌过程有预定抗力的模拟装置，用于评价 灭菌过程的有效性。其内部放置化学指示物时称化 学PCD，放置生物指示物时称生物PCD。 4．4 灭菌质量的监测 4．4．1通用要求 4．4．1．6 按照灭菌装载物品的种类，可选择具 有代表性的PCD进行灭菌效果的监测。 72 7 注：1、新安装、移位、大修、灭菌失败、包装 材料或被灭菌物品改变，应对灭菌效果进行重 新评价，包括采用物理监测法、化学监测法、 生物监测法进行监测（重复三次），监测合格 后，灭菌器方可使用。 2、检测所用化学和微生物指示物必须经卫生部 批准，并在有效期内使用。 74 7 监测注意事项： 1、采取的样本要有代表性及足够的样本数量，并应 仔细分析污染来源； 2、被采样本面积＜100cm2取全部表面，被采样本表 面积≥ 100cm2取100cm2； 3、若消毒因子为化学消毒剂，采样液中应加入相应 的中和剂； 76 4、采样时，尽量用大小一致的无菌棉签，并将棉签通过采 样管壁挤压，去除多余的采样液，使之处于湿润状态，而 不是浸泡状态，然后按30°角度轻轻地有序地用力均匀地 涂抹采样品，禁用干棉签采样； 5、送检时间不得超过6h，若样品保存于0-4℃，则不得超过 24h; 6、采样时应注意无菌操作规程，以保证结果的准确性。 77 7、样液接种于平皿后应尽快倾注营养琼脂培养基，避免样 液干燥于平皿上，影响结果的准确性。 8、倾注时琼脂培养基不得超过45 ℃，以防损伤细菌或真菌。 倾注和摇动时，动作应尽量平稳，以利于细菌分散均匀， 便于计数菌落。勿使培养基外溢，以免影响结果的准确性 和造成环境的污染。 9、每日观察细菌生长情况。培养至规定时间,计数最终结果 的菌落数。 78