[人文社科]第五章非切片法的制作.ppt

第五章 非切片法的制作 第一节 整体制片法 第二节 涂片法* 第三节 分离法 第四节 铺片法 第五节 滴片法* 第六节 压片法 注射PHA（植物细胞凝集素）或酵母液 注射秋水仙素 低渗 固定 滴片 第五节 滴片法 第五章 染色体制片材料的选择： 分裂程度高 细胞易于分散 含较少的间质和其它嗜碱性物质 染色体标本制备程序： 一、鱼类染色体标本的制备 第五节 滴片法 第五章 胚胎(卵裂期或原肠期)，上皮细胞，鳃细胞，肾（头肾)细胞 1、材料选择： 注射部位 杀死鱼前8~10h或16~18h, PHA(8~10μg/g鱼体重)或酵母液(0.2~0.5ml/100g鱼体重) 杀死鱼前4~5h，秋水仙素 (3~5μg/g鱼体重) 取头肾 ,制备细胞悬液 0.075mol/L KCl， 低渗 加固定液静置20~30min，重复2-3次 冷滴片 Giemsa染色 第五节 滴片法 第五章 外周血短期培养法 细胞培养法 头肾-PHA 注射-淋巴细胞富集法 头肾-PHA 注射法 小鱼游泳法 组织浸泡法 花鲈染色体 第五节 滴片法 第五章 二、贝类染色体的制作 材料选择： 卵胚、幼体（囊胚期 ~担轮幼虫期）、鳃、生殖细胞 （4~8细胞期卵胚） 4细胞出现后10~25min，每隔5min处理1批 （0.03~0.04%秋水仙素，30min） 低渗：25%海水， 35℃，30min 固定：1：1醋酸甲醇，1：3醋酸甲醇 热滴片 染色 皱纹盘鲍 * * 自学 染色：甲基绿、碘液、1%美兰 第一节 整体制片法 二、半永久和永久性制片 一、临时制片 第五章 1. 甘油封片法 5%甘油 标本 蒸发2-3天 载片 怕压、易碎标本： 2. 甘油胶封片法 避免蒸发或流动： 最适合于柔软易碎材料。 材料固定、水洗 5%甘油2h 10%甘油1h 甘油胶封片 石蜡或漆封边 玻璃丝 （直径0.2- 0.5mm ） 第一节 整体制片法 第五章 3. 甘油或甘油胶-树胶双封片法 材料要观察的面朝向大盖片 盖玻片 载玻片 盖玻片的小片朝下封于载片上 第五章 第一节 整体制片法 甘油或甘油胶封片 中性树胶封片 4. 聚乙烯醇封片法 吸虫 新鲜和固定的标本 小而透明的标本用木素粉红或酸性品红染色 乳酸和石炭酸等量混合剂配4%、5%、10% 甲壳动物、单殖吸虫、寄生线虫、棘头虫 及动物中粘孢子 单殖吸虫 猪带绦虫 棘头虫 第五章 第一节 整体制片法 30%Alc→40%Alc→50%Alc→60%Alc→70%Alc →80%Alc→95 % Alc→100%Alc→100%Alc →纯酒精/二甲苯2：1→1：1→1：2→纯二甲苯 （1）原生动物(或小型浮游生物)整体封片法 材料特点：在液体培养基中培养或制备成的悬液 弃培养液 各级酒精脱水、二甲苯透明 封片 固定液 离心 离心 中性树胶 弃上清液 第一节 整体制片法 第五章 5. 树胶封片法 离心机的转速 纽虫 肝片吸虫 肝片吸虫 华枝睾吸虫 材料特点：身体扁平如叶片状，固定时易卷缩 用薄荷冰/水合氯醛于7%生理盐水麻醉 (2) 吸虫整体封片 第五章 第一节 整体制片法 70%Alc 虫体 70%Alc固定2~12h 硼砂洋红液染虫体3~10h 70%Alc冲洗 常规脱水、透明、封片 滤纸 载片 第五章 第一节 整体制片法 (3)琼脂定位，薮枝虫(或水螅体、卵胚)整体封片 水螅 材料特点：易收缩、需要定位 聚缩虫 薄荷冰麻醉 10%甲醛固定 稀释的苏木精/硼砂洋红染色 酒精分色 用琼脂定位于载片上 常规脱水、透明、封片 第一节 薮枝虫 第五章 第一节 整体制片法 第二节 涂片法 将一些不需切片的动植物的组织细胞或体液组织（如动物的血液、精液、骨髓等）用机械的方法使其均匀地摊在载片上，再进行固定、染色、观察。 对玻片要求严格 洗液 12h 流水冲至中性 95%Alc Smear 第五章 一、人血液涂片 Blood Smear 2. 涂片方法： 1. 取血： 血滴于一端1/3处 30-40° 用力均匀 血涂片自然晾干 第二节 涂片法 第五章 注意： 滴血后马上涂片 推片速度、角度大小与血膜厚薄有关 一张载片只能涂1次 用来推片的载片一边只能用1次 （1） Wright 染色法 （2） Giemsa染色法 瑞氏粉含曙红和亚甲蓝 吉氏粉含曙红和天青 对酸碱敏感！ 天青加热会消失！ 第二节 涂片法