从微孔板检测至Westerns定量全面探索细胞热-MolecularDevices.PDF

从微孔板检测至Westerns定量： 全面探索细胞热应激反应 简介 材料 许多手段可以帮助研究者来探索细胞的各 • CHO-K1细胞（ATCC P/N CCL-61） 种反应过程，并且可从中获得其大量的生 • 细胞培养基（Ham’s F12中加入10%胎 优势 物学信息，如细胞成像、基于细胞的活力 牛血清和1%的双抗） • 无需任何染料分子即可以检 检测和增殖检测等。Western Blot（即蛋 测细胞增殖 • 黑色，底透细胞培养微孔板（Corning 白质免疫印迹法）不仅可用于观察蛋白质 P/N 3603） • 荧光染料标记成像后可用于 表达情况的变化。通常情况下我们需要多 • SpectraMax i3微孔板读板机 探究细胞死亡机制 台仪器协同工作才能够获得足够多的信 息，当然整个过程我们也不得不需要掌握 • SpectraMax MinMaxTM 300细胞成像 细胞成像，基于细胞功能实 更多种不同的软件。 系统 • 验以及Western Blot检测都 可以通过同一平台来实现 • EarlyTox Cell Integrity试剂（Molecular 此篇应用文章我们展示出如何仅利用一台 Devices P/N R8213） 仪器，即SpectraMax® i3多功能检测平台 就可以完成对许多细胞相应参数的收集和 • CellEvent Caspase-3/7绿色检测试剂 处理，我们用热应激反应作例来展示不同 （Life Technology P/N C10423） 检测方式特点，包括成像和Western Blot • ScanLater Westen Blot检测系统 功能，多重手段方便我们观察细胞内不同 • ScanLater抗鼠检测试剂盒-铕元素 反应过程带来的不同变化。 标记羊抗鼠的二抗 众所周知正常细胞长时间暴露在高温环境 • ScanLater Western Blot检测卡盒 下会引起细胞凋亡，同样也会提高细胞 • 抗HSP-70鼠源单抗（RD检测系统 HSP70（Heat Shock Protein）的表达 P/N MAB1663） 量。我们将CHO-K1细胞置于两种不同的 • I m m o b i l o n - F L 膜 ， 0 . 4 5 µ m 孔 径 生长环境下，即健康环境和压力环境，首 （EMD Millipore P/N IPFL 00010） 先将两种环境下的细胞经过热激处理以 后，我们利用SpectraMax® i3多功能检 测 平台的细胞成像功能去检测其细胞增 方法 殖、活力和凋亡的情况。我们也可利用 预先处理两份CHO-K1细胞，分别将其处 ScanLaterTM Western Blot检测系统获 于健康环境和压力环境。健康细胞为定期 得的数据经分析后发现，HSP70表达量与 更换培养基而且传代过程保证其汇合度