药物氟尼康中盐酸多西环素、苯尼考的高效液相色谱检测.pptVIP

药物氟尼康中盐酸多西环素、苯尼考的高效液相色谱检测 药品简介 盐酸多西环素、氟苯尼考为我国兽药标准《兽药国家标准-兽药地方标准上升国家标准 第一册》中批准的内服药。 盐酸多西环素（doxycycline hydrochloride）为四环素类广谱抗生素，主要用于革兰氏阳性和阴性菌感染[1] 氟苯尼考（florfenicol）为氯霉素类广谱抗生素，主要用于治疗鱼、猪、牛及家禽类的细菌性感染[2] 我国及欧盟、日本等国对盐酸多西环素和氟苯尼考在动物体内含量有严格要求，因此对于有治疗作用的氟尼康中盐酸多西环素和氟苯尼考的含量的测定，需有严格标准定量测定。药典中包含两种物质各自的检测方法，而对于两种物质的同时检测没有相应的规定。因此，建立盐酸多西环素和氟苯尼考的同时检测的方法，在药物生产和药品检验过程中极为重要 本HPLC方法简介 采用较为简单的溶剂作为流动相 建立了同时检测两种物质的高效液相色谱法 方法简便、精确、检测灵敏度高，分析时间短等优点，可以作为药品质量标准制定的依据和参考 仪器与试剂 仪器： 高效液相色谱仪（LC-10ATvp日本岛津公司） 配SPD-10Avp紫外检测器 配大连依利特公司色谱柱Hypersil-ODS2 （4.6mm×250mm 5μm ） TOP色谱工作站； 针筒式微孔滤膜过滤器0.45μm AL-204电子天平PHS-3CPH计 KQ3200B型超声波清洗器 Hypersil ODS是硅胶基质上键合了C18为官能团的色谱柱填料，是典型的高效液相色谱柱用填料，适合于分析非极性和中性样品，包括酸性、中性及亲脂性化合物 价格： 4.6*150*5u 1200.00元 4.6*200*5u 1250.00 4.6*250*5u 1300.00 试剂： 试剂 药品氟尼康 盐酸多西环素标准品 氟苯尼考标准品 甲醇 （色谱纯） 乙腈（色谱纯） 磷酸二氢铵 三次蒸馏水 流动相为乙腈：甲醇：磷酸二氢铵（0.1mol/L）=10:11:29 pH=3.50 检测波长为254nm 流速为1mL·min-1 柱温：30℃ 进样量10μL 灵敏度0.01AUFS(满量程的吸光度单位 Absorbance units, full scale) 溶液配制 储备溶液配制： 分别精密称取盐酸多西环素、氟苯尼考标准品各50mg，置于50mL棕色容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，4℃冰箱冷藏待用 供试液的制备： 用研钵将氟尼康研碎后，称取50mg，置于50mL棕色容量瓶中，用流动相溶解后并定容，作为供试液，4℃冰箱冷藏待用 基本操作 1. 打开电脑主机，再打开高效液相色谱的模块，启动工作站并初始化仪器 2. 仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：流动相组成=乙腈：甲醇：磷酸二氢铵（0.1mol/L）=10:11:29，流速=1mL/min 3. 运行程序，清洗色谱柱，直至基线平稳，然后进样，进行测定 4. 测定结束后，依次用纯水、100%甲醇洗涤20分钟，退出主程序，关闭计算机 结果与讨论 流动相的选择: 实验中考察了乙腈-水、甲醇-水的不同比例的流动相对两者的分离效果，盐酸多西环素和氟苯尼考的出峰时间相同，不能够达到分离。因此将乙腈、甲醇以一定比例混合加入磷酸二氢铵的盐溶液，对三种溶液比例进行了调节，实验中随着乙腈和甲醇比例的增加，两种物质出峰时间同时前移，分离效果渐差；当乙腈比例逐渐增大时，氟苯尼考的色谱峰型渐差；当甲醇比例逐渐增大时，盐酸多西环素的色谱峰型托尾严重；磷酸二氢铵盐溶液比例增加时，两种物质出峰时间向后推移，且分离效果逐渐变优，但盐溶液加入过多时二者保留时间较长，且分离不佳。此外pH值的确定也会同时影响二者的分离效果，适当减小pH值，可以达到较优的分离效果。实验通过调节得到： 乙腈：甲醇：磷酸氢二铵溶液=10：11：29 ，pH=3.50，为最佳比例 检测波长的选择 检测波长的选择： 盐酸多西环素的紫外吸收的最大波长为269nm，氟苯尼考的紫外吸收的最大波长为220nm，盐酸多西环素和氟苯尼考结构式中均含有苯环，因此为了使得两者都能更好的检测，选定检测波长为254nm。 药品氟尼康中盐酸多西环素和氟苯尼考的分离色谱图、标准品盐酸多西环素和氟苯尼考的分离色谱图分别如图1、2所示： 图1 药品氟尼康中盐酸多西环素和氟苯尼考的分离色谱图 图1 标准品盐酸多西环素和氟苯尼考的分离色谱图 标准曲线的绘制 标准曲线的绘制: 精确移取储备液适量，并将储备液置于容量瓶中，用流动相定容，由此逐级稀释得一系列的标准溶液，用孔径0.45μm的有机系微孔滤膜滤