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食品微生物与检测技术 上海农林 食品微生物与检测技术 上海农林 实验一 显微镜的使用 一 实验目的 二 实验器材 三 实验内容和方法 四 注意事项 五 实验作业 Antony van Leeuwenhock 自制单式显微镜观察到细菌等微生物个体 一、实验目的 1.掌握普通光学显微镜的基本构造、使用方法、保护要点。 2.使用显微镜观察几种细菌的基本形态。 三、实验内容和方法 二、实验器材 1.显微镜、 2.微生物形态的染色标本。 （一）显微镜的结构 1 显微镜的结构图 2 显微镜的结构 1）机械系统 ： 镜座、镜柱、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、推进器、调焦螺旋； 2）光学系统 ： 物镜（低倍镜10x、高倍镜40x和油镜 100x ） 目镜（5X、 10x、15x ） 光源 聚光器(聚光镜和可变光阑) 3）光源物体的放大倍数=物镜的放大倍数×目镜的放大倍数 1 普通光学显微镜最小分辨力为0.2um,而大多数微生物（病毒等除外）的直径都在0.5um以上； 2 低倍镜的工作距离25mm、中倍镜7.63mm、高倍镜0.5mm、油镜0.2mm。(细菌直径0.5~2um;霉菌直径2~10um;酵母菌宽度1~5um) 3 公式：Ｒ＝0.612λ／NA ;(R分辨力和NA成反比) R-分辨力； λ－波长； NA －物镜的数值孔径（开口率）；0.612－系数 　　公式：NA ＝n.sin a ／2 n－折射率； a－镜口角度数，大小取决于物镜的直径和焦距； 低倍镜的a值最小，油镜的a值最大；空气n-折射率1.0、水n-折射率1.33、香柏油n－折射率1.52 4 结论： 分辨力（1）低倍镜中倍镜高倍镜油镜 （2）Ｒ和n、 a成反比 3 显微镜的原理 （二）实验方法 1 观察前的准备 1）显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地将显微镜搬运到实验桌上。 2）将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约10cm左右，右侧可放记录本或绘图纸。 3）调节光照:将10×物镜转入光孔，自带光源的显微镜，可通过调节电流旋钮来调节光照强弱。 放置→对光→调焦→观察→记录→整理 2 低倍镜观察? 1）镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯。因为低倍镜视野较大，易于发现目标和确定检查的位置。 2）将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处在物镜正下方，转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。 ? 在低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好的显微镜，低倍、高倍镜头是同焦的，在转换物镜时要从侧面观察，避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节粗调节旋钮，慢慢下降载物台直至物像出现，再用细调节旋钮调至物像清晰为止，找到需观察的部位，并移至视野中央进行观察。 3 高倍镜观察 4 油镜观察 （1）将油镜转至正下方，用粗调节器将油镜头升约距平台2cm。 （2）手执玻片标本，在镜检部位滴上一滴香柏，油小心将此玻片进入显微镜平台。 （3）小心下降镜筒：以粗调下降镜头，此时从侧面注视油镜慢慢浸在香柏油中，几乎与标本相碰，特别注意：不能将油镜头压在标本上，更不能用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头。 （４）用粗调节器将镜筒徐徐上升（此时不准下降镜筒）。直到视野出现模糊物像为止，然后再用细调节器校正焦距。如果油镜头已离开泽面而仍未见物像，用粗调节器将油镜升高距平台约2cm后，必须在从侧面观察将油镜下降重复，上述操作到物像看清为止。 （５)观察完毕，上旋镜筒，取出标本片之后，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后沾取少许二甲苯。擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。勿用手或其他纸擦镜头，以免损坏镜头。用绸布擦镜显微镜的机械部分。 1）下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许乙醚乙醇混合液擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭2—3下即可，（注意向一个方向擦拭）。 2）将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，再将载物台下降至最低，降下聚光器，反光镜与聚光器垂直，最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中。 5 观察完后复原 1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，本学期一直使用本台显微镜。 2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。 4.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视