14-药品微生物学检验.pptVIP

项目十四 药品的微生物学检验 214页 附录5 思考以下问题： 要求无菌的生理盐水注射液如何检验是否无菌？ 有抗菌作用的青霉素粉针剂又如何检验是否无菌？ 口服药如何检验细菌数是否1000/g？ 视频资源 供试品的制备/programs/view/iwTM9H1Bn98/ 无菌检查和微生物限度检查/isearch/%E6%97%A0%E8%8F%8C%E6%A3%80%E6%9F%A5/ （上） 药品标准和食品标准是两套不同的体系。 药品微生物检验的验证更加严格：方法更加可靠，且不易被供试品中的抑菌物质干扰 药品检验结果的可靠性来自于严谨的方法学验证。为何规定要进行方法学的验证？ 许多药品本身具有抑菌性(如抗生素类药品、含防腐剂药品)会对检查结果带来影响 样品的预处理方式、检验条件和培养条件也都会影响到样品的微生物检测结果 检验方法的准确性、有效性和重现性 药品微生物检查 无菌检查：药品物品是否呈无菌状态 微生物限度检查：物品中含有微生物的数量 控制菌检查：是否有指定的病原菌存在 药品的无菌、微生物限度检查的验证试验 方法：在采用的检验方法和过程中，通过分别加入规定量的代表性微生物 以试验供试品是否在规定的检验量、在所采用的检验条件下无抑菌性，或已充分消除了抑菌性(供试品本身的以及操作系统中可能对微生物生长有影响的各种因素) 以试验所用方法对微生物生长无不良影响 无菌检查所用的培养基制备 需氧菌、厌氧菌培养基：硫乙醇酸盐流体培养基 真菌培养基：改良马丁培养基 选择性培养基：对氨基苯甲酸培养基(用于磺胺类药物的无菌检查)，聚山梨酸培养基(用于油剂药品的无菌检查) 培养基的保存 配制后灭菌，灭菌好的培养基应保存在2℃～25℃、避光的环境 若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用 若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用 培养基的适用性检查 检查培养基是否无菌及灵敏度 培养基的无菌性检查 培养基的灵敏度检 培养基的无菌性检查 每批培养基随机取不少于5支(瓶)，放置于相应的温度下培养14天 培养基应无菌生长，表明所制备的培养基达到无菌要求 培养基的灵敏度检查 接种低浓度的试验菌株，培养观察生长情况 培养基灵敏度判定 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则说明该培养基可以使低浓度的微生物也良好生长，表明培养基的灵敏度符合规定 试验菌株 需氧菌有金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26003〕、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10104〕和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)〔CMCC(B)63501〕 厌氧菌有生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64941〕 酵母菌有白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕 霉菌有黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98003〕 对试验菌株的要求 菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代) 试验菌株用于试验时，细胞或孢子浓度需小于100cfu/ml 菌悬液制备 (如何使浓度100cfu/ml?) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30℃～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养24～48小时 上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数小于100 cfu/ml的菌悬液。 菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用 菌悬液制备 (如何使浓度100cfu/ml?) 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％(v/v)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％(v/v)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成含孢子数小于100 cfu/ml的孢子悬液。 黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在贮存期内使用 培养基接种及培养 取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种上述浓度的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌等4种菌的菌悬液各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天 取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种上述浓度的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。 常用的稀释液、冲洗液 常用的稀释液有0.1%蛋白胨水溶液 常用的冲洗液有